漆酶試劑盒測定步驟

漆酶試劑盒測定意義漆酶（Laccase）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應用。

樣品測定的準備：

1、細胞、細菌或組織樣品的制備 ：

細菌或細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，棄上清；按照每100萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），之后置沸水浴振蕩提取10min；10000g，常溫離心10min，取上清，冷卻后待測。

組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿；之后置沸水浴振蕩提取10min，10000g，常溫離心10min，取上清，冷卻后待測。

2、血清（漿）樣品：取100μL血清（漿）加入1mL提取液，充分混勻，之后置沸水浴振蕩提取10分鐘，10000g，常溫離心10分鐘，取上清，冷卻后待測。

3、標準品的處理：稱取1mg，將標準品稀釋為15、10、8、6、4、2、1、0 μg/ml。

漆酶試劑盒測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至520nm，蒸餾水調(diào)零。

2、取0.5mL上清液（或稀釋后的標準品）+0.5mL試劑一+0.5mL試劑二于有蓋試管中，置沸水浴中保溫30min（蓋緊，防止水分散失），每10min振蕩一次。

3、待冷卻后，在試管中加入1mL試劑三，振蕩30s，靜置片刻，使色素轉(zhuǎn)至試劑三；吸取0.8mL-1mL上層溶液于1mL玻璃比色皿中，用試劑三調(diào)零，于520nm波長處比色，記錄吸光值。

4、根據(jù)標準品吸光值和濃度，建立標準曲線。