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    小鼠12-羥基二十烷四烯酸elisa檢測試劑盒注意事項和操作流程

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    小鼠12-羥基二十烷四烯酸elisa檢測試劑盒   注意事項:
    1.不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同,務必按照所用試劑盒嚴格操作,否則容易產(chǎn)生檢測結果的不確定性.
    2.若不同批號人ELISA試劑盒的不同組分(A液或酶工作液),或不同試劑的不同組分進行交叉使用,有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高,花板等情形。
    3.反應時間的誤差,做大量標本時,*孔和zui后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。
    4.臨界值附近標本波動為正常現(xiàn)象,任何試劑均不可避免。可以考慮將標本做奇數(shù)次復檢。
    5.加樣時樣品量誤差,對于陰或很陽的標本影響不大,但對閾值附近的標本影響極大,建議校對加樣器。

    小鼠12-羥基二十烷四烯酸elisa檢測試劑盒       操作流程:
    (1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
    (2)酶標板置4℃,包被過夜。
    (3)洗板:吸干孔內(nèi)反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
    (4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
    (5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
    (6)洗板,同(4)。
    (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
    (8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
    (9)洗板,同(4)。
    (10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
    (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
    (12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
    (13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

     

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