熒光定量PCR實驗中各個環(huán)節(jié)的對照

     對照的目的是對檢測的各個環(huán)節(jié)進行監(jiān)控，因此我們按照檢測的流程對對照進行梳理。常規(guī)熒光定量PCR的流程是：樣品采集-運輸-樣品處理-核酸提取-反轉(zhuǎn)錄（RNA病毒）-擴增-結(jié)果讀取。下面看看各個環(huán)節(jié)都可以使用哪些對照？

1、陽性對照和陰性對照

陽性對照和陰性對照是指在相同的處理條件下，比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品，都進行了提取和擴增最終獲得了陽性結(jié)果和陰性結(jié)果。陰陽性對照強調(diào)處理過程與樣品一致，并且有明確的預(yù)期結(jié)果。

2.擴增對照

我們通常說的陽性對照和陰性對照指的是擴增試劑盒中附帶的不需要提取的陽性對照和陰性對照，更準(zhǔn)確的定義應(yīng)該是擴增陽性對照和擴增陰性對照。擴增陽性對照含有陽性擴增模板，擴增陰性對照應(yīng)含有陰性擴增模板（基質(zhì)核酸）。擴增對照只能監(jiān)控每次擴增過程中的擴增系統(tǒng)是否正常，不能監(jiān)控采樣、提取和每份樣品的操作過程。如果是檢測RNA樣品的檢測試劑盒，其擴增陽性對照使用質(zhì)粒，便無法監(jiān)控反轉(zhuǎn)錄過程。 

3、內(nèi)標(biāo)（Internal Control，IC）

內(nèi)標(biāo)是指在同一反應(yīng)管中與靶序列共同擴增的一段非靶序列分子。內(nèi)標(biāo)有兩種形式，一種是使用天然樣品中含有的內(nèi)參基因作為內(nèi)標(biāo)，另一種是人工添加的內(nèi)標(biāo)。內(nèi)標(biāo)的最大特點是與靶序列共同擴增，而其他的對照都是獨立擴增。