RT-PCR 實(shí)驗(yàn)中的逆轉(zhuǎn)錄酶三種活性

      逆轉(zhuǎn)錄是指以 RNA 為模板，合成與其互補(bǔ)的 cDNA 的過(guò)程。逆轉(zhuǎn)錄 PCR 是將 RNA 的逆轉(zhuǎn)錄（reverse transcription）和 cDNA 的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）相結(jié)合的技術(shù)，故逆轉(zhuǎn)錄稱為 RT-PCR 或反轉(zhuǎn)錄 PCR。逆轉(zhuǎn)錄酶是存在于 RNA 病毒體內(nèi)的依賴 RNA 的 DNA 聚合酶。RT-PCR 實(shí)驗(yàn)中的逆轉(zhuǎn)錄酶需要具有以下三種活性

1. 依賴 RNA 的 DNA 聚合酶活性：以 RNA 為模板合成 cDNA 的第一條鏈；

2. Rnase 水解活性：水解 Rnase 雜合體中的 RNA;

3. 依賴 DNA 的 DNA 聚合酶活性：以一條 DNA 鏈為模板合成互補(bǔ)的雙鏈 DNA

在選擇逆轉(zhuǎn)錄酶時(shí)，建議選擇無(wú) RNaseH①活性（RNaseH-）的逆轉(zhuǎn)錄酶。具有 RNaseH 活性的逆轉(zhuǎn)錄酶的 RNaseH 活性會(huì)與聚合酶活性競(jìng)爭(zhēng) RNA 模板與 DNA 引物（或 cDNA 延伸鏈）形成的雜合鏈，并降解雜合鏈中的 RNA 鏈。被 RNaseH 活性所降解的 RNA 模板不能再作為合成 cDNA 的有效底物，降低了 cDNA 合成的產(chǎn)量與長(zhǎng)度。