免疫細胞分離技術 ?

免疫細胞分離技術 

1、淋巴細胞的分離

取肝素抗凝血1ml加Hanks 液1：1 稀釋后，沿管壁徐徐滴流疊加盛有2ml淋巴細胞分離液的試管內（注意勿與分離液混合，然后2000r/min 水平離心20min，管內分為4 層，自上而下依次為血漿，單個核細胞，顆粒白細胞、紅細胞。用毛細管伸至單個核細胞層中（位于細胞分離液與血漿的界面上），沿管壁輕輕吸出全部細胞。然后用Hanks 液洗兩次，每次2000r/min 離心10min，最后用RPMI l640 培養液將細胞配成2×106/m1 的細胞懸液備用。

2、T 細胞及B 細胞的分離

將淋巴細胞懸液通過尼龍棉柱，B 細胞粘附于尼龍棉上，T細胞則不粘附，先用RPMI l640 培基洗脫尼龍棉柱，流下的細胞懸液含有豐富的T 細胞。然后用力反復擠壓尼龍柱、擠出粘附在尼龍棉上的B 細胞，并用少量的RPMI l640 培基洗脫，此細胞懸液含有豐富的B 細胞。尼龍柱（塑料管）的長短和尼龍棉的多少，視分離細胞的多少而定。

3、CD4 及CD8 細胞的分離

⑴CD4 細胞的分離：將一定量的T 細胞懸液通過一根SephDdexC—10 柱，然后用少量的RPMll640 培養洗滌，收獲的細胞懸液約含85%的CD4 細胞。

⑵CD8 細胞分離：用Tris 緩沖液稀釋羊抗鼠IgG（濃度為10μg/m1)包被一平皿表面，然后放置4℃過夜，沒有包被上的抗體用PBS 洗凈。然后將已標記有抗CD8 單克隆抗體的T 細胞（細胞濃度為1×l07/m1)3m1 加入上述的平皿內，4℃放置2 小時，用PBS 輕輕洗凈末粘附的細胞，然后用毛細管加入10m1 PBS 吹打。收集的脫落細胞經洗滌后懸浮在RPMI l640 培基中備用。CD4 細胞亦可用此法分離。

4、單核巨噬細胞的分離

單核巨噬細胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴細胞則無此特性，借此可將這兩類細胞分開，其方法簡述如下。將待分離的細胞懸液（如實物動物的腹腔液）加入適當大小的塑料或玻璃平皿內，置于37℃ C02 溫箱內溫育1 小時，然后用RPMI 1640 培基輕輕漂洗平皿表面，去除非粘附細胞，再將粘附有細胞的平皿表面用上述培基輕輕洗刷，收集粘附的單核巨噬細胞。如果要獲得純度較高的單核巨噬細胞，可重復上述過程。