特異性的選擇考慮的四個(gè)方面

特異性的選擇主要需要考慮四個(gè)方面：蛋白特異性、種屬特異性、實(shí)驗(yàn)方法特異性、標(biāo)記物的特異性。

1、蛋白特異性

針對(duì)需要檢測(cè)的蛋白查找抗體，幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分：

a.重組蛋白如果不是全長(zhǎng)表達(dá)，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。

b.內(nèi)源性蛋白最好能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對(duì)，并結(jié)合抗體免疫原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。

c.磷酸化蛋白檢測(cè)需要確定具體位點(diǎn)，不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在，不宜一概而論。

2、種屬特異性

同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。

a.目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計(jì)多肽抗原的，根據(jù)蛋白的同源性的情況與其他種屬發(fā)生交叉反應(yīng)。需要參照說(shuō)明書(shū)注明的可反應(yīng)種屬信息。

b.一些稀有種屬很難找到抗體，可以通過(guò)蛋白的序列比對(duì)，選擇同源序列免疫的抗體，不過(guò)一般這種情況生產(chǎn)商不會(huì)受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴，如果可以申請(qǐng)到免費(fèi)的抗體樣品，則利于抗體選擇。

3、實(shí)驗(yàn)方法特異性

目前使用抗體的實(shí)驗(yàn)方法有很多，不同的使用方法過(guò)程中，因?yàn)閷?duì)蛋白樣品的處理方式不一樣，蛋白的含量有差異，對(duì)抗體的識(shí)別表位和效價(jià)要求都是不一樣的。

4、標(biāo)記物的特異性

一般基于實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)方法不會(huì)使用帶有標(biāo)記的一抗，比如 WB、IHC 等，都是通過(guò)二抗類的試劑標(biāo)記達(dá)到結(jié)果呈現(xiàn)的目的。但是基于儀器分析的一些實(shí)驗(yàn)，可能就會(huì)使用到直接標(biāo)記的一抗，比如流式實(shí)驗(yàn)。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測(cè)到的熒光范圍，針對(duì)不通的參數(shù)要求選擇對(duì)應(yīng)的標(biāo)記物。在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，需要選配不同的熒光標(biāo)記物。