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    RIPA Buffer配制

    時間:2021/12/21閱讀:1131
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    1.  基礎成分

    Tris-HCl(緩沖液成分,防止蛋白變性)

    NaCl(鹽份,防止非特異蛋白聚集)

    NP-40(非離子去污劑,提取蛋白;用H2O配制成10%儲存液)

    去氧膽酸鈉(離子去污劑,提取蛋白;用H2O配制成10%儲存液;避光保存)

    注意:準備激酶(致活酶)實驗時,不要加去氧膽酸鈉,因為離子型去污劑能夠使酶變性,導致活性喪失。
     

    2.  RIPA蛋白酶抑制劑

    苯甲ji 磺酰氟(PMSF)(用異丙醇配制成200 mM的儲存液,室溫保存)

    EDTA(鈣螯合劑;用H2O配制成100 mM的儲存液,PH 7.4)

    亮抑酶肽(Leupeptin)(用H2O配制成1 mg/ml的儲存液,分裝,-20℃保存) 

    抑蛋白酶肽(Aprotinin)(用H2O配制成1 mg/ml的儲存液,分裝,-20℃保存)

    胃蛋bai 酶抑制劑(Pepstatin)(用甲醇配制成1 mg/ml的儲存液,分裝,-20℃保存)
     

    3.  RIPA磷酸(酯)酶抑制劑

    激活的Na3VO4(用H2O配制成200 mM的儲存液

    NaF(200 mM的儲存液,室溫保存)

    注意:在準備做磷酸(酯)酶實驗的時候,不加磷酸酯酶抑制劑。


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