穩定細胞株篩選步驟方法

時間：2021/9/15閱讀：1172

穩定細胞株已廣泛應用于重組蛋白、抗體生產、檢測分析、免疫治療藥物開發等研究領域。表達的蛋白/抗體穩定性更好，批次間差異小，是生物醫藥研發的基礎。有時候，為了滿足細胞需求，我們會構建穩定細胞株而不是瞬時轉染。相對瞬時轉染而言，穩定轉染是指進入細胞的質粒整合入細胞基因組中，并能隨細胞分裂穩定傳遞下去。

穩定細胞株篩選：

方法一：先把質粒整合到染色體上后，用相應的質粒DNA中的抗性標志來篩選該細胞系，單克隆篩選穩定細胞株。

第一步：篩選濃度測定，以10~14 天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；

第二步：進行細胞接種，轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80% 覆蓋；

第三步：進行細胞轉染

第四步：利用質粒上含有的抗性選擇進行篩選，并鑒定篩選結果。

方法二：應用逆轉錄病毒，慢病毒轉染，篩選穩定細胞株。慢病毒可以攜帶外源基因隨機整合進基因組。轉染得到穩定細胞株的效率高，是建立穩定株的*方式。

第一步：將人源化的抗體基因轉接到慢病毒載體上，

第二步：使用包裝細胞，一般為293細胞，包裝出病毒，不同類型病毒包裝時間一般在3-5天。

第三步：用病毒轉染目的細胞。包裝好的病毒要先測滴度，根據滴度決定轉染目的細胞的病毒量。

第四步：后期篩選。轉染目的細胞1-2天后加抗生素篩選得到穩定細胞株。

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