碳水化合物技術原理方法

碳水化合物試驗步驟：

1、貼壁細胞用胰酶消化，離心收集。

2、細胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次，離心收集。試驗步驟2再重新作一邊。

3、加入5mlDNA提取緩沖液，（10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS）,混勻。

4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達到100ug/ml,混勻，50℃水浴3h,

5、用等體積的酚抽提一次，2500rpm離心收集水相，用等體積的（酚，）混合物抽提一次，2500r/min離心收集水相

6、用等體積的，抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻，冰浴，10min.。

7、2500rpm離心10min.轉上清于一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。2500rpm,離心10min。棄上清。

8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉（PH5.2）與2倍體積-20℃預冷無水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶于適量TE中。

碳水化合物技術原理：

(1).抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

(2).結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

(3).酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。

(4).受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。

(5).此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。

(6).加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度pg-ng/ml水平，并且重復性好。以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特-反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術