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    初級會(huì)員 | 第8年

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    BHK-21敘利亞倉鼠腎細(xì)胞操作步驟

    時(shí)間:2018/11/14閱讀:313
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    BHK-21敘利亞倉鼠腎細(xì)胞操作步驟:

    收到細(xì)胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況。

    (一)如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,換8-10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

    (二)如果細(xì)胞已長滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:

    1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。

    2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。

    3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明,收到細(xì)胞后的次傳代一般是一傳二。

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