《熒光定量聚合酶鏈反應分析儀校準規范》征求意見

　　【儀表網 儀表標準】5月6日，貴州省市場監督管理局發布了《熒光定量聚合酶鏈反應分析儀校準規范》征求意見稿，現開始公開征求意見。
 

　　2020年隨著新型冠病毒在全球的快速傳播和高感染率，如何快速、高效的確診新冠病毒患者顯得尤為重要，實時熒光定量PCR儀因其時間短、成本低等特點，已成為目前應用最廣泛的新冠肺炎確診方法之一。實時熒光定量PCR儀用于精確檢測新型冠狀病毒在患者體內存在的數量、是否復制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據。
 

　　實時熒光定量PCR儀(real-time quantitative PCR，RQ-PCR)是在聚合酶鏈式反應技術(Polymerase Chain Reaction，PCR)的基礎上研發出來的新技術，所謂real-time quantitative PCR技術，是一種新的核酸定量技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。熒光定量可以實現精確定量，普通PCR則不行。熒光定量體現可以看到整個擴增過程，可以看到擴增效率，溶解溫度，直接得到的標準曲線等，這些是普通PCR無法實現的。實時熒光定量PCR分析儀主要通過儀器內部熱循系統的升降溫變化，使得DNA或RNA片段得以復制擴增，儀器光學系統采集伴隨DNA或RNA擴增產生的熒光信號，并對熒光信號進行分析轉化、數學運算后，得到擴增和熔解曲線。具體數據就是實時熒光定量PCR儀的重要參數Ct值(Ct value)、閾值(threshold)和基線(baseline)。通常，第3-15個循環的熒光值就是基線，是由于測量的偶然誤差引起的。閾值一般是基線的標準偏差的10倍。在實際操作中也可以手動調節，位于指數期就可以。Ct值就是熒光值達到閾值時候的PCR循環次數。所以是一個沒有單位的參數。
 

　　在熒光信號定量部分，由于Ct值直接關系定量準確度，對于實時熒光定量PCR分析儀來說，Ct值是實時熒光定量PCR分析儀光學系統主要的校準參數。除此之外，還要進行熒光強度檢測重復性和熒光線性相關性的校準。
 

　　根據黔市監辦函〔2020〕603號文件下達的“ 熒光定量聚合酶鏈反應分析儀校準規范”制定任務，制定出適合貴州省醫用麻醉機的地方計量校準規范，滿足貴州省計量工作的需要，使熒光定量聚合酶鏈反應分析儀計量性能準確可靠，測量結果具有溯源性，進而為正確診斷提供計量保障，為熒光定量聚合酶鏈反應分析儀的質量監督、校準、質控安全等提供技術依據。
 

　　本規范依據JJF 1071-2010《國家計量校準規范編寫規則》和JJF 1001-2011《通用計量術語及定義》的要求編寫，依據JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》給出了校準結果測量不確定度及評定示例。校準方法及計量特性等主要參考了JJF 1527-2015《聚合酶鏈反應分析儀校準規范》、YY/T 1173-2010《聚合酶鏈反應分析儀》、JJF1101-2019 《環境試驗設備溫度、濕度參數校準規范》。
 

　　依據JJF 1071-2010《國家計量校準規范編寫規則》，本規范內容包括范圍、引用文件、概述、計量特性、校準條件、校準項目、校準方法、校準結果的表達等內容。
 

　　本規范為首次發布。本規范適用于熒光定量聚合酶鏈反應分析儀的校準，其他類型聚合酶鏈反應分析儀，可參照本規范執行。