【儀表網 儀表文件】農貿(集貿)市場是新冠肺炎疫情防控的重點場所，為科學規范指導開展農貿(集貿)市場新冠病毒環境監測工作，深入開展病毒溯源和疫情防控，國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯防聯控機制綜合組組織編制了《農貿(集貿)市場新型冠狀病毒環境監測技術規范》(以下稱《規范》)。
《規范》內容包括監測對象、監測內容、樣本采樣、檢測等內容，以及各環節注意事項，同時進一步明確了每一步的實驗步驟、防護措施及所需的儀器：比如核酸提取儀、實時熒光定量PCR、離心機、病毒采樣箱、病毒采樣管、氣溶膠采集器、樣品記錄單、手消設備、潔凈采樣袋、冰袋、高危險生物樣本轉運箱和生物安全垃圾袋等。
《農貿(集貿)市場新型冠狀病毒環境監測技術規范》
農貿(集貿)市場是新冠肺炎疫情防控的重點場所，加強對農貿(集貿)市場新冠病毒環境監測，對于深入開展病毒溯源和疫情防控意義重大。為科學規范指導開展農貿(集貿)市場新冠病毒環境監測工作，特制定本技術規范。
一、監測對象
監測重點為具備區域輻射能力的大型農貿(集貿)市場，特別是包括冷凍、冷藏功能的肉類和海鮮水產交易攤位，或者存在潮濕、密閉空間的市場。
二、監測內容
(一)市場內重點攤位的設施、用具表面病毒檢測。重點對攤位臺面、面板、地面、把手，以及各種制作和使用器具等表面，包括脫毛或切割機械、刀具等，采集拭子樣本。
(二)市場內重點攤位從業人員咽拭子、衣物表面、手部病毒檢測。對處于工作狀態的從業人員手部表面，采集拭子樣本。
(三)市場內重點攤位存放食品的冰箱、冷藏柜內部表面病毒檢測。對儲藏食物過程中經常觸及的冰箱、冷藏柜內表面，采集拭子樣本。
(四)市場內銷售的肉、禽類和海鮮水產類食品的病毒檢測。對市場內銷售的食品應當按照無包裝食品和有包裝食品加以區分，其中有包裝類食品重點是需要冷藏運輸的肉、禽類和海鮮水產類食品，采集拭子樣本。
(五)市場內排水系統中污水的病毒檢測。重點包括市場內海鮮水產、肉禽類產品攤位來源的污水，采集拭子樣本或污水樣本。
(六)市場內公共空間中人員接觸較多的部位，包括主要進出口的電梯按鈕、樓梯扶手、門把手表面，茶水間、衛生間等公用設備設施表面，潮濕的公共通道和衛生間地面、墩布池等采集拭子樣本。
(七)市場內經常性跨區域移動的工具或物品，包括垃圾車、垃圾桶、墩布等清潔工具，轉運物品的拖車等，采集拭子樣本。
(八)市場內工作人員聚集、通風不良的環境，包括辦公室、工具間、休息間、局部交易環境等環境拭子及氣溶膠樣本。
三、樣本采樣
(一)樣本要求。
1.從業人員咽拭子、手部、衣物和其他物體表面拭子樣本：要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集的手部或物體(包括公共通道的地面)的表面重復涂抹、涮洗3次以上。同時要滿足對采樣對象表面，進行多點分布式采樣。
2.食品表面拭子樣本：食品樣本不可直接進行采集，應當首先將擬采集的食品小心分離，并存放于潔凈采樣袋后，再進行拭子樣本的采集。要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集食物樣本的表面重復涂抹、涮洗3次以上。同時要滿足對樣本表面，進行多點分布式采樣。
3.污水樣本：按照市場內排水系統分布情況，選取2-3處污水采樣位置，重點為內部管網匯集處、水流方向的下游或與市政管網的連接處。采集拭子樣本要求，用采樣棉簽浸入污水中，使其吸附污水并在采樣管中對涮洗3次以上。采集污水樣本要求，用聚乙烯塑料瓶收集30-500mL污水水樣；大于500mL體積的污水采集可以使用聚乙烯塑料桶或現場水樣專用富集設備。同時要滿足對污水采樣位置，進行多點分布式采樣。
4.動物樣本：對于活體動物，可分別用采樣棉簽采集其體表拭子、口咽拭子和肛拭子，也可以采集其排泄物或分泌物樣本，并在記錄單上進行相應記錄。對于以經過剝皮等處理的動物樣本，分別用棉簽采集其體表和體腔拭子樣本，要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集食物樣本的表面重復涂抹、涮洗3次以上。同時要滿足對樣本表面，進行多點分布式采樣。
5.其他器具：籠具或魚缸等裝運、養殖動物的容器，需首先觀察或了解該容器具體存放、養殖過的動物類型，采集容器內壁拭子樣本或內容物液體樣本。
6.人員聚集、通風不良的局部交易區域、辦公室、休息間等環境采集氣溶膠樣本。
(二)采樣方法。
1.采樣周期：對重點大型集貿市場(特別是銷售生鮮類產品的市場)按照1次/周，對其余需要監測的集貿市場按照1次/月的頻次進行病毒監測。
2.采樣實施：現場采樣由兩名以上的工作人員參與完成，采樣時應當穿戴防護服、防護口罩、鞋套和醫用一次性手套。采樣過程需開啟現場采樣視頻記錄設備。
3.采樣裝備：病毒采樣箱、病毒采樣管、氣溶膠采集器、樣品記錄單、手消設備、潔凈采樣袋、冰袋、高危險生物樣本轉運箱和生物安全垃圾袋等。
4.采樣記錄：樣本信息應當包括樣本采集的采樣時間、地點、集貿市場名稱、攤位編號、采樣類型、樣本編號以及采樣人等信息。
5.采樣操作：采樣開始前，要求穿戴防護服、口罩、鞋套和手套等個人防護用品進入采樣現場，并使用手消進行手部消毒。拭子樣本采樣過程中，采樣棉簽只能接觸當前采集的樣本，避免觸碰到其他物體。污水樣本采集前，先充分攪勻，然后取樣。污水分三層以上，不能攪勻時，可按各層量的多少的比例分層取樣。氣溶膠樣本采集使用氣溶膠采集器，設定采集高度、空氣通量和采集時間，進行氣溶膠采集，將采集后的吸收液或濾膜放置在特定的低溫容器進行轉運。采樣結束后，清理廢棄物后離場。
6.樣品轉運：采集樣品連同采樣記錄單應當在24小時內運送至當地指定的病毒監測機構進行檢測，樣本建議冷藏存放于高危險生物樣本轉運箱中，并由專人、專車進行轉運。
四、檢測
(一)樣本分裝和保存。
1.樣本分裝：標本采集后應當在生物安全二級實驗室生物安全柜內分裝，但個人防護裝備參照生物安全三級實驗室的防護要求。所有采集對環境標本應當分裝到大小適合的帶螺旋蓋內有墊圈、耐冷凍的樣本采集管里，按照1000ul/管進行分裝。容器(采集管)外注明樣本編號、種類及采樣日期。用于后續核酸提取和病毒分離等實驗室檢測工作。
2.樣本保存：用于病毒分離和核酸檢測的標本應當盡快進行檢測，能在24小時內檢測的標本可置于4℃保存；24小時內無法檢測的標本則應當置于-70℃或以下保存(如無-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存)。
(二)污水水樣前期處理。使用離心技術去除污水中雜質。先打開低溫離心機，待溫度降至4℃左右，建議4654離心力離心30分鐘，取上清。再使用膜吸附技術或超濾技術進行上清液的濃縮。
(三)核酸提取。新型冠狀病毒的常規檢測方法是通過實時熒光RT-PCR鑒定。任何新型冠狀病毒的檢測都必須由經過相關生物安全及技能培訓的人員進行操作。對已經滅活的樣本，應當在生物安全二級(BSL-2)實驗室內，使用自動化核酸提取儀，配套核酸提取試劑盒進行病毒核酸的提取。核酸提取后，應當將核酸產物進行分裝，用于后續核酸實時熒光定量(RT-PCR)及深度測序。核酸提取操作參考相關廠家試劑盒說明書開展。
(四)實時熒光定量PCR。在BSL-2實驗室中對所有已提取的核酸樣本，應當用經CFDA批準的RT-PCR診斷試劑進行新型冠狀病毒核酸檢測，以保證實驗結果的正確可靠。RT-PCR反應體系和操作參考相關廠家試劑盒說明。每一次RT-PCR反應均應當設置陰性對照、陽性對照和無模板空白對照，以確保擴增體系工作正常。
五、實驗室生物安全
實驗室安全級別參照新版《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南(第二版)》的相關內容進行管理。采集的環境樣本屬于未經培養的感染性材料，在采用可靠的方法滅活前進行的病毒抗原檢測、血清學檢測、核酸提取、生化分析，以及臨床樣本的滅活等操作，應當在生物安全二級實驗室進行，同時采用生物安全三級實驗室的個人防護。環境樣本在采用可靠的方法滅活后進行的核酸檢測、抗原檢測、血清學檢測、生化分析等操作應當在生物安全二級實驗室進行。
來源：國家衛健委網站
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