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    • 天根試劑盒-細(xì)菌基因組-DP302

    天根試劑盒-細(xì)菌基因組-DP302

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    • 型號(hào)
    • 品牌
    • 所在地蘇州市
    • 更新時(shí)間2023-04-09
    • 廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
    • 所在地區(qū)蘇州市
    • 實(shí)名認(rèn)證已認(rèn)證
    • 產(chǎn)品數(shù)量842
    • 人氣值4744
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    天根試劑盒-細(xì)菌基因組-DP302采用離心吸附柱和緩沖液系統(tǒng),既適用于革蘭氏陰性菌基因組DNA的提取,也可適用于革蘭氏陽性菌基因組DNA的提取。
    天根試劑盒-細(xì)菌基因組-DP302 產(chǎn)品詳情

    天根試劑盒-細(xì)菌基因組 DP302


    DP302


    天根DP302

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介

        細(xì)菌基因組 DP302采用離心吸附柱和緩沖液系統(tǒng),既適用于革蘭氏陰性菌基因組DNA的提取,也可適用于革蘭氏陽性菌基因組DNA的提取。

        本試劑盒也可用于食品致病菌(微生物) 基因組提取,如:、霍亂弧菌、出血性大腸桿 菌O157:H7、單增李斯特、沙門氏菌、阪崎腸肝菌等。可從1-5 ml細(xì)菌培養(yǎng)液中,快速提取純化10-40 μg 純凈的基因組DNA,所得基因組DNA可直接用作PCR 模板、酶切、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

    產(chǎn)品特點(diǎn)

    ■ 簡(jiǎn)單快速:革蘭氏陰性菌在1小時(shí)內(nèi)可獲得高質(zhì)量的基因組DNA。

    ■ 質(zhì)量好:DNA可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

    下游應(yīng)用

    ■ 革蘭氏陰性菌基因組提取。

    ■ 革蘭氏陽性菌基因組提取。

    ■ 食品中致病菌基因組提取。

    自備試劑

    ( 革蘭氏陽性菌)、緩沖液(20 mM Tris, pH8.0; 2 mM Na2-EDTA; 1.2%Triton-100 )

    注意事項(xiàng) 

    請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。

     1.樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

     2.若緩沖液GA或GB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,并搖勻后使用。

     3.所有的離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī),室溫下離心。

    操作步驟 使用前請(qǐng)先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入CH3CH2OH,加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。

     1. 取細(xì)菌培養(yǎng)液1-5 ml,10,000 rpm(~11,500×g)離心1 min,盡量吸凈上清。

     2. 向菌體沉淀中加入200 μl緩沖液GA,振蕩至菌體懸浮。

     注意:對(duì)于較難破壁的革蘭氏陽性菌,可略過第2步驟,加入溶液進(jìn)行破壁處 理。

    具體方法為:加入110 µl緩沖液(20 mM Tris, pH 8.0;2 mM Na2-EDTA;1.2% Triton),和70 µl溶液(50 mg/ml,客戶自備,目錄號(hào):RT401),37 ℃處理30 min以上。如果需要去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液(客戶自備,目 錄號(hào):RT405-12),振蕩15 sec,室溫放置5 min。 

    3. 向管中加入20 μl Proteinase K溶液,混勻。 

    4. 加入220 μl緩沖液GB,振蕩15 sec,70 ℃放置10 min,溶液應(yīng)變清亮,簡(jiǎn)短離心以去除 管蓋內(nèi)壁的水珠。

     注意:加入緩沖液GB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀,一般70℃放置時(shí)會(huì)消失,不會(huì)影響后續(xù)實(shí) 驗(yàn)。

    如溶液未變清亮,說明細(xì)胞裂解不,可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不 純。 

    5. 加220 μl CH3CH2OH,充分振蕩混勻15 sec,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

    6. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中), 12,000 rpm (~13,400×g ) 離心30 sec,倒掉廢液,將吸附柱CB3放入收集管中。 

    7. 向吸附柱CB3中加入500 μl緩沖液GD,12,000 rpm (~13,400×g ) 離心30 sec,倒掉廢液,將吸附柱CB3放入收集管中。 

    8. 向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW,12,000 rpm (~13,400×g ) 離心30 sec,倒掉廢液,吸附柱CB3放入收集管中。

    9. 重復(fù)操作步驟8。 

    10. 將吸附柱CB3放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,倒掉廢液。

    將吸附柱 CB3置于室溫放置數(shù)分鐘,以晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

     注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,漂洗液中的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實(shí)驗(yàn)。 

    11. 將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 μl洗脫緩 沖液TE,室溫放置2-5 min,12,000 rpm (~13,400×g ) 離心2 min,將溶液收集到離心管 中。

     注意:洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50 μl,體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對(duì)于 洗脫效率有較大影響。

    若用ddH2O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi),pH值低 于7.0會(huì)降低洗脫效率;且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。

        為增加基因組 DNA的得率,可將離心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室溫放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g )離心2 min。

     DNA濃度及純度檢測(cè)

        得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。 DNA應(yīng)在OD260處有吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml 單鏈DNA。 OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,而使用ddH2O,比值會(huì)偏 低,因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但并不表示純度低。

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