Colilert(科立得) 24小時(shí)即可定性/定量檢測總大腸菌群(Coliform)和大腸埃希氏菌(E.Coli)
愛德士的科立得® 試劑在廣泛的被使用在檢測水中總大腸菌群、大腸埃希氏菌以及耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）。在美國, 90 ％以上的實(shí)驗(yàn)室使用科立得® 的[固定底物技術(shù)酶底物法] (Defined Substrate Technology, DST®) 。在美國、加拿大與日本的飲用水市場科立得® 的使用率事實(shí)上大于其它所有檢驗(yàn)方法的總和。。
科立得™ 獲得美國環(huán)保署的認(rèn)可，并列為《水與廢水檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)測試方法》。在中國，科立得™是商品化的固定底物技術(shù)酶底物法而列入中國國家標(biāo)準(zhǔn)《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T5750.12-2006）。
如何使用科立得®
定性測試（P/A）
步
在100ml水樣中加入科立得®試劑，混勻，36℃±1培養(yǎng)24h。
第二步判讀結(jié)果
無色=陰性
黃色=總大腸菌群陽性
黃色＋熒光=大腸埃希氏菌陽性
注：耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）需44.5℃培養(yǎng)24h后，觀察黃色為陽性
定量檢測
步
在100ml水樣中加入科立得®試劑，混勻
第二步
倒入Quanti-Tray™（51孔）或者 Quanti-Tray™/2000 （97孔）定量盤中
第三步
用程控定量封口機(jī)對定量盤進(jìn)行封裝，36℃±1℃培養(yǎng)24小時(shí)
第四步
Quanti-Tray™ 51 孔定量盤結(jié)果判讀
無色=陰性
黃色格子=總大腸菌群
黃色＋熒光格子=大腸埃希氏菌
對照MPN表計(jì)算結(jié)果
注：耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）需44.5℃培養(yǎng)24h后，觀察黃色格子，為陽性結(jié)果，對照MPN表
Quanti-Tray™/2000 97孔定量盤結(jié)果判讀
無色=陰性
黃色格子=總大腸菌群
黃色＋熒光格子=大腸埃希氏菌
對照MPN表計(jì)算結(jié)果
注：耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）需44.5℃培養(yǎng)24h后，觀察黃色格子，對照MPN表
科立得(Colilert)®優(yōu)點(diǎn) 準(zhǔn)確/可信 |
精確檢出100ml水樣中單個(gè)的活性總大腸菌群和大腸埃希氏菌，以及糞大腸菌群，假陰性率低. 每個(gè)單位試劑可抑制200萬個(gè)異養(yǎng)細(xì)菌，假陽性率低. 消除傳統(tǒng)方法中的主觀判斷影響，準(zhǔn)確性高于濾膜法及多管發(fā)酵法. 2006年被列入到《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T5750.12-2006），是認(rèn)可的MMO-MUG培養(yǎng)基；經(jīng)美國環(huán)保署的認(rèn)可作為24 小時(shí)檢驗(yàn)出廠水與源水中總大腸菌群和大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）的方法；通過水與廢水檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)方法分析化學(xué)工作者協(xié)會(huì) (AOAC) 、國際瓶裝水協(xié)會(huì) (IBWA) 及歐洲瓶裝水協(xié)會(huì) (EBWA)認(rèn)證；美國、加拿大、英國、德國、法國、日本、韓國、阿根廷、巴西、澳大利亞、新西蘭、南非等50多國家及地區(qū)的飲用水，地表水，污水等檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn). 年使用量超過數(shù)千萬次，美國90%以上的實(shí)驗(yàn)室使用科立得®。 |
簡單/快捷 |
檢測總大腸菌群和大腸埃希氏菌時(shí)間不超過24小時(shí)，2個(gè)指標(biāo)一次完成，無需確認(rèn)試驗(yàn) 簡單培訓(xùn)就能輕松使用，手工操作少于一分鐘. 不會(huì)因?yàn)檫^濾阻塞（濾膜法）或異樣細(xì)胞的干擾（多管法）而進(jìn)行重復(fù)測試. 科立得®和51或97孔定量盤聯(lián)合使用，不用稀釋可以定量檢測100ml水中1~200個(gè)或1~2419個(gè)目標(biāo)細(xì)菌. 無需玻璃器皿清洗及菌落計(jì)數(shù). |
科學(xué)性：科立得(Colilert)®的工作原理
科立得®的成分是受保護(hù)的MMO-MUG選擇性培養(yǎng)基（Minimal Media ONPG-MUG）。
當(dāng)科立得®加入含有總大腸菌群細(xì)菌組的水樣，目標(biāo)細(xì)菌在MMO-MUG培養(yǎng)基中繁殖，大腸菌群細(xì)菌組產(chǎn)生的特異性生物酶β－半乳糖苷酶能分解MMO-MUG培養(yǎng)基中的色原底物ONPG，使培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色反應(yīng)；同時(shí)水樣中大腸埃希氏菌產(chǎn)生特異性的β－葡萄糖醛酸酶分解MMO-MUG培養(yǎng)基中的熒光底物MUG，產(chǎn)生特征性熒光。同樣原理，耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）在培養(yǎng)44.5℃時(shí)會(huì)分解MMO-MUG培養(yǎng)基中的色原底物ONPG，使培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色反應(yīng)。
大腸桿菌以β-葡糖醛糖苷酶代謝甲基香豆基葡糖醛酸苷（MUG）產(chǎn)生螢光。因?yàn)榇蠖鄶?shù)非─大腸桿菌屬菌類沒有這些酶，所以無法在科立得® 里生長及干涉這些物質(zhì)。
有這些酶的少數(shù)非─大腸桿菌屬菌類會(huì)受到科立得® 特殊配方的基質(zhì)選擇性的抑制作用。
科立得®可以定性檢測水中大腸菌群和大腸埃希氏菌以及糞大腸菌群。當(dāng)水樣中少數(shù)非目標(biāo)細(xì)菌的生物酶試圖和ONPG或MUG反應(yīng)，干擾檢測結(jié)果時(shí)， MMO-MUG培養(yǎng)基中特殊配方的基質(zhì)會(huì)抑制其反應(yīng)進(jìn)程，控制假陽性的產(chǎn)生；同時(shí)，這些特殊配方基質(zhì)可以有效促進(jìn)目標(biāo)細(xì)菌的生物酶和底物反應(yīng)，所以假陰性發(fā)生率比傳統(tǒng)方法更低。這就是采用固定底物技術(shù)（DST）的酶底物法，及其的MMO-MUG培養(yǎng)基。如果聯(lián)合Quanti-Tray™（51孔定量盤）或者Quanti-Tray™2000（97孔定量盤）使用，可以定量檢測100ml水中1~200個(gè)或1~2419個(gè)目標(biāo)細(xì)菌，而不要稀釋，這就是固定底物技術(shù)（DST）酶底物法的多孔定量盤法。
普通的酶底物法采用ONPG-MUG培養(yǎng)基，而非MMO-MUG培養(yǎng)基，不能有效降低假陽性和假陰性的產(chǎn)生，也并非《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T5750.12-2006）的國標(biāo)檢測方法。
所有的愛德士「受檢物檢驗(yàn)技術(shù)」（DST®）試劑都可用于定性測試（P/A）檢驗(yàn)容器、 Quanti-Tray™ 定量盤或 Quanti-Tray™ 定量盤/2000 檢驗(yàn)盤里。
科立得(Colilert)®問答集
科立得®的貯存條件是什么？
2-30°C避光儲(chǔ)存。
2-30°C避光儲(chǔ)存。
科立得® 陽性比色盤是什么？
科立得® 陽性比色盤是一種液體的比色劑。目的在于協(xié)助區(qū)別結(jié)果是否顯陽性。
科立得® 陽性比色盤是一種液體的比色劑。目的在于協(xié)助區(qū)別結(jié)果是否顯陽性。
科立得® 陽性比色盤如何使用？
在24-28小時(shí)期間，使用比色盤對照每個(gè)反應(yīng)的樣品。當(dāng)檢測結(jié)果顏色變化或者熒光顯色不明顯時(shí)，將比色盤與檢測結(jié)果比較，任何與比色盤顏色相同或更強(qiáng)的黃色及螢光都考慮為陽性結(jié)果。
在24-28小時(shí)期間，使用比色盤對照每個(gè)反應(yīng)的樣品。當(dāng)檢測結(jié)果顏色變化或者熒光顯色不明顯時(shí)，將比色盤與檢測結(jié)果比較，任何與比色盤顏色相同或更強(qiáng)的黃色及螢光都考慮為陽性結(jié)果。
科立得® 試劑應(yīng)該是什么顏色？
科立得® 試劑應(yīng)該是干燥，流動(dòng)性的，白色或略帶灰 (或黃) 色的白色。如遇到任何有關(guān)試劑顏色或有效性的問題請您與愛德士技術(shù)服務(wù)部門聯(lián)絡(luò)。
科立得® 試劑應(yīng)該是干燥，流動(dòng)性的，白色或略帶灰 (或黃) 色的白色。如遇到任何有關(guān)試劑顏色或有效性的問題請您與愛德士技術(shù)服務(wù)部門聯(lián)絡(luò)。
科立得® 檢測結(jié)果在28 小時(shí)后判讀準(zhǔn)確嗎？
定性試驗(yàn)時(shí)，如果是陰性結(jié)果就有效。做定量檢測時(shí)，如果科立得® 超過培養(yǎng)時(shí)間，沒有任何顏色變化是有效的陰性檢驗(yàn)結(jié)果；超過 28 小時(shí)出現(xiàn)黃色是無效的結(jié)果，應(yīng)重新檢驗(yàn)。
定性試驗(yàn)時(shí)，如果是陰性結(jié)果就有效。做定量檢測時(shí)，如果科立得® 超過培養(yǎng)時(shí)間，沒有任何顏色變化是有效的陰性檢驗(yàn)結(jié)果；超過 28 小時(shí)出現(xiàn)黃色是無效的結(jié)果，應(yīng)重新檢驗(yàn)。
科立得®檢測結(jié)果在24 小時(shí)內(nèi)判讀準(zhǔn)確嗎？
定性試驗(yàn)，如果培養(yǎng)未滿24小時(shí)，而樣品中總大腸菌群以及大腸埃希氏菌都顯陽性，則此結(jié)果有效；如果只是大腸菌群呈陽性（黃色），則可證明總大腸菌群結(jié)果有效，還需要等到24小時(shí)后判斷是否含有大腸埃希氏菌。
定性試驗(yàn)，如果培養(yǎng)未滿24小時(shí)，而樣品中總大腸菌群以及大腸埃希氏菌都顯陽性，則此結(jié)果有效；如果只是大腸菌群呈陽性（黃色），則可證明總大腸菌群結(jié)果有效，還需要等到24小時(shí)后判斷是否含有大腸埃希氏菌。
為何水樣要培養(yǎng) 24-28 小時(shí)？
科立得®試劑中添加的抑制與ONPG和MUG反應(yīng)的非大腸菌群屬的抑制劑最多可以作用到28小時(shí)，如果超過了28小時(shí)，一些干擾細(xì)菌就會(huì)克服科立得®的抑制系統(tǒng)而與 ONPG 或 MUG 起反應(yīng)。超過28小時(shí)的陰性結(jié)果有效，但是陽性結(jié)果需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。
科立得®試劑中添加的抑制與ONPG和MUG反應(yīng)的非大腸菌群屬的抑制劑最多可以作用到28小時(shí)，如果超過了28小時(shí)，一些干擾細(xì)菌就會(huì)克服科立得®的抑制系統(tǒng)而與 ONPG 或 MUG 起反應(yīng)。超過28小時(shí)的陰性結(jié)果有效，但是陽性結(jié)果需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。
可以使用科立得®進(jìn)行定量檢測嗎？
可以，科立得®可用 Quanti-Tray™（51孔）定量盤 ,Quanti-Tray™ 2000（97孔）定量盤進(jìn)行定量檢測。
可以，科立得®可用 Quanti-Tray™（51孔）定量盤 ,Quanti-Tray™ 2000（97孔）定量盤進(jìn)行定量檢測。
科立得®是否是中國國家標(biāo)準(zhǔn)方法？
是，科立得®已經(jīng)列入中國《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測方法》GB/T5750.12-2006，是商品化的固定底物技術(shù)酶底物法，其成分是MMO-MUG培養(yǎng)基，并受保護(hù)。
是，科立得®已經(jīng)列入中國《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測方法》GB/T5750.12-2006，是商品化的固定底物技術(shù)酶底物法，其成分是MMO-MUG培養(yǎng)基，并受保護(hù)。
科立得®的檢出線是多少？
科立得®能檢測出100ml水樣中的1個(gè)總大腸菌群與大腸埃希氏菌以及糞大腸菌群菌體。
科立得®能檢測出100ml水樣中的1個(gè)總大腸菌群與大腸埃希氏菌以及糞大腸菌群菌體。
科立得®的貯存期有多久？
科立得®的貯存期從制造日期算起，科立得®可貯存18個(gè)月。
科立得®的貯存期從制造日期算起，科立得®可貯存18個(gè)月。
部分附件
Quanti-Tray定量程控封口機(jī)
Quanti-Tray 51孔定量盤橡膠襯墊或 Quanti-Tray 97孔定量盤橡膠襯墊
Quanti-Tray 51孔定量盤或 Quanti-Tray 2000 97孔定量盤®
Colilert 51孔陽性比色盤或 Colilert 97孔陽性比色盤
Colilert定性陽性比色瓶
取樣瓶
紫外燈
培養(yǎng)箱
