Smartarose是一種球形瓊脂糖凝膠過濾基質(zhì)，Smartarose 4B和Smartarose 6B的瓊脂糖含量分別為4%和6%o Smartarose CL凝膠是 Smartarose 4B和Smartarose 6B的衍生物，化學(xué)和物理性能更優(yōu)異，流速更快。Smartarose CL凝膠耐有機(jī)溶劑，因此適合在有機(jī)溶劑 中分離物質(zhì)。Smartarose和Smartarose CL分離范圍較廣，適合對分子量不同的樣品進(jìn)行表征或分離。
瓊脂糖凝膠填料性能
| 項目 | 性能 |
| Smartarose 瓊脂糖 分離范圍 粒徑 推薦線性流速* (cm/h) pH穩(wěn)定性** | 4B 6B CL-4B CL-6B 4% 6% 4% 6% 70x103-20x106 1Qx103 -4x106 70x103-20x106 10x10 3-4x106 45-165 pm 11 cm/h 14 cm/h 26 cm/h 30 cm/h 4-9 4-9 3-13 3-13 耐受凝膠層析常用溶液，如8 M尿素、6 M 鹽酸 |
| 試劑耐受 | 耐受凝膠層析常用溶液，如8 M尿素、6M鹽酸 Mo也耐受乙醇、DMF、THE、 丙酮、DMS、 弧。 氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、卩比卩定、磷酸三乙 酯和乙月青等有機(jī)溶劑。 |
| 物理性能 滅菌 | pH或離子強(qiáng)度變化引起的體積變化可以忽略不計 化學(xué)方法 水蒸氣高壓滅菌，120°C, 20 min |
pH范圍是我們根據(jù)實驗和經(jīng)驗估算的。請注意：pH長期穩(wěn)定性是指凝膠在長時間內(nèi)其層析性能不會改變的pH范圍。pH短期穩(wěn)定性是指凝膠再生和清洗時穩(wěn)定的pH范圍。
裝柱說明：
介質(zhì)保存于20%乙醇。裝柱前建議將20%乙醇抽濾去除，置換成去離子水。
將75%介質(zhì)和25%去離子水混句，真空負(fù)壓脫氣。不要使用粘性試劑裝柱。裝柱完成后，可以用粘性緩沖液低流速平衡層析柱。
2.2介質(zhì)裝填
裝柱方法有兩步，第二步應(yīng)在恒壓下進(jìn)行，柱壓見表2。凝膠層析的分辨率隨柱床高度的增加而增加。因此，柱床高度在60 cm以上。
表2.推薦裝柱流速和壓力
| 介質(zhì) | 步驟1 流速(cm/h) | 步驟2 壓力(MPa.bar.Psi) |
| Smartarose 4B | 15 | 0.018,0.18,2.6 |
| Smartarose 6B | 30 | 0.025,0.25,3.6 |
| Smartarose CL-4B | 30 | 0.025,0.25,3.6 |
| Smartarose CL-6B | 30 | 0.045,0.45,6.4 |
| 層析柱的裝填(使用儲液器裝填) 裝柱前根據(jù)層析柱直徑計算柱子底面積，根據(jù)所需裝柱高度計算所需介質(zhì)體積，公式如下： V = 1.157ir2h |
| |
V：所需介質(zhì)體積ml
1.15：壓縮系數(shù)（不同介質(zhì)壓縮系數(shù)不同）
r：柱管半徑cm
h：裝填高度cm
1） 用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無氣泡，關(guān)閉柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去離子水。
2） 將填料懸浮起來，小心的將漿液連續(xù)地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生。
3） 如果使用儲液器，應(yīng)立即在層析柱和儲液器中加滿水，將進(jìn)樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進(jìn)樣管中產(chǎn)生氣泡。
4） 打開層析柱底部出口，開啟泵，使其在設(shè)定的流速下進(jìn)行。最初應(yīng)讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至最終流速，這樣可避免液 壓對所形成柱床的沖擊，也可以避免柱床形成的不均勻。如果達(dá)不到推薦的壓力或流速，可以用你所使用泵的流速，這樣也可以得到 一個很好的裝填效果。（注意：在隨后的色譜程序中，不要超過裝柱流速的75%）當(dāng)柱床高度穩(wěn)定后，在最后的裝柱流速下至少再上2 倍柱床體積的去離子水。標(biāo)上柱床高度。
5） 關(guān)閉泵，關(guān)閉層析柱出口。
6） 如果使用儲液器，去除儲液器，將分配器置于層析柱中。
7） 將分配器推向柱子至標(biāo)記的柱床高度處。允許裝柱液進(jìn)入分配器，鎖緊分配器接頭。
8） 將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統(tǒng)中，開始平衡。如果需要可以重新調(diào)整分配器。
2.3柱效測試
為了檢驗層析柱的質(zhì)量，應(yīng)進(jìn)行柱效測試，以確定理論塔板數(shù)和峰不對稱系數(shù)。
洗脫液：去離子水
樣品：2% （v/v）丙酮水溶液或者1 M NaCI溶液
如圖1所示計算理論塔板數(shù)，用如下公式：N/m = 5.54 （VrM）2 x 1000/L
計算峰不對稱系數(shù)（AS）公式如下：AS = b/a （如圖1所示）
3 .純化流程
3.1緩沖液的準(zhǔn)備
所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22 pm或0.45 pm濾膜過濾。
平衡液為蛋白純化后，用于保護(hù)蛋白的溶液，根據(jù)客戶需求自行選擇。
3.2樣品準(zhǔn)備
樣品在上樣前建議離心或用0.22 pm或0.45|jm濾膜過濾，減少雜質(zhì)，防止堵塞柱子。
3.3樣品純化
1） 平衡
上樣之前，用平衡液至少平衡兩個柱體積，或直到基線穩(wěn)定。含去垢劑的溶液可能需要平衡更長時間。
2） 上樣
推薦上樣體積為柱體積的2-5%o可以通過上樣管或樣品環(huán)來上樣。純化流速不能超過裝柱流速的70%0
3） 再生
再生通常用水沖洗2倍柱體積，然后用緩沖液沖洗2-3倍柱體積，如果不立刻使用，則用20%乙醇平衡后，4-30°C保存。對不同的樣品, 建議大約5次循環(huán)后，采用完整的在位清洗（CIP）o
4.清洗及保存
4.1 CIP （Cleaning In Place）清洗
CIP是去除以前生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的結(jié)合過緊密、沉淀或變性的物質(zhì)。在某些情況下，介質(zhì)再生后，月謳或變性蛋白跡物質(zhì)仍可育誡留茁掃=o 需要制鵰料中已知污染I刎樓來設(shè)H特定的CIP程序。
當(dāng)出現(xiàn)下列情況，需要對介質(zhì)進(jìn)行在位清洗：
?柱壓增高；
?填料顏色變化明顯；
?分辨率降低；
?上接頭與凝膠表面之間出現(xiàn)空隙；
?如果反壓增高，在介質(zhì)清洗前檢查閥門、管線等中止情況。
1） 去除非特異性結(jié)合蛋白和脂蛋白
用0.5 M NaOH清洗一個柱體積，去離子水或緩沖液平衡至中性，流速40 cm/ho
2） 去除一些沉淀或變性物質(zhì)，建議使用下面的方法
用4倍柱體積的1.0-2.0 M NaOH溶液，流速40 cm/h對介質(zhì)進(jìn)行清洗，然后立即用2-3倍柱體積的水清洗。
3） 去除一些強(qiáng)結(jié)合的疏水蛋白
用4-10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗（使用有機(jī)溶劑要梯度清洗，避免起泡）或者用含去垢劑的酸或中性溶液。比如，用1 M 醋酸溶液含0.5%非離子型去垢劑，清洗流速40 cm/h。隨后用70%乙醇沖洗5個柱體積洗去殘留去垢劑。
4.2保存
CIP之后的介質(zhì)如果不使用可以用20%乙醇，4 -30°C保存。
5 .訂購信息及相關(guān)產(chǎn)品
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
|
| SEC0060 | 25 ml |
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| SEC0061 | 100 ml |
| Smartarose 4B | SEC0062 | 500 ml |
|
| SEC0063 | 1 L |
|
| SEC0064 | 10 L |
|
| SEC0070 | 25 ml |
|
| SEC0071 | 100 ml |
| Smartarose 6B | SEC0072 | 500 ml |
|
| SEC0073 | 1 L |
|
| SEC0074 | 10L |
|
| SEC0080 | 25 ml |
|
| SEC0081 | 100 ml |
| Smartarose CL-4B | SEC0082 | 500 ml |
|
| SEC0083 | 1 L |
|
| SEC0084 | 10L |
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| SEC0090 | 25 ml |
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| SEC0091 | 100 ml |
| Smartarose CL-6B | SEC0092 | 500 ml |
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| SEC0093 | 1 L |
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| SEC0094 | 10 L |
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