功能
• 二硫鍵還原反應器
• HDX反應器
隨著生物制藥產品在市場上的快速增長，對蛋白質組學研究中更快速、更有效的結構闡明方法的需求越來越大。在這個工作流程中有一個小而關鍵的步驟，那就是二硫鍵的還原。傳統的方法是使用化學方法來實現這一點。Antec開發了用于自動在線二硫化物鍵還原的ROXY反應器。
該方法是基于一個電勢來觸發還原反應，不使用還原性化學品。傳統上，還原是使用化學品進行的，例如二硫蘇糖醇(DTT)，需要在LC/MS分析之前去除。此外，也可以使用無硫醇還原劑，如TCEP(三(2-羧乙基)膦)?；瘜W法樣品制備是費力的，很難與在線LC/MS相結合。用質譜在線設置的電化學是干凈的，不需要化學品，結果可以即時監測。
圖1：ROXY EC系統配備了µ- prepcell2.0流通池，并與布魯克SolariX 12T FT-ICR質量聯用，進行準確的蛋白質MS和MS/MS分析
二硫鍵對HDX-MS來說是一個挑戰，因為它們增加了蛋白質對酶解的穩定性，這可能導致低序列覆蓋，特別是在富含半的區域。
因為HDX淬火條件(0°C和pH2.5)下的還原速度較慢, 傳統上使用的化學還原劑(如TCEP)通常不能處理高二硫鍵結合的蛋白質。此外，這些藥劑通常需要在高濃度下使用，這可能導致廣泛的加合物形成和離子抑制.
在HDX兼容的條件下，電化學還原已經成功地用于還原重二硫鍵結合的蛋白，使序列覆蓋其他難以達到的區域，并繞過不利的離子抑制ROXY HDX反應提供了高還原效率，改進的可重復性和穩健性，沒有不必要的蛋白質氧化。
圖2：Waters HDX-MS (Synapt G2Si)系統與ROXY聯用的示意圖，電化學流通池可以在0°C(1)下放置在HDX管理器內或在室溫(2)下放置在室外。
