23966 Polysciences全國代理-上海鼎桑

我們公司zui大優勢是強大的采購：

  上海鼎桑生物科技有限公司一家專注于生命科學的科技企業，由在國內科研試劑領域有著豐富從業經驗的技術團隊和管理團隊組建而成，專營進口生物試劑，科學儀器，實驗消耗品等。
       公司將不斷把上優質的產品引入國內市場，滿足客戶的需求，公司也將緊跟生命科學的發展，為廣大科研工作者探索生命科學的奧秘奉獻綿薄之力.

Polysciences全國代理-上海鼎桑

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PEI轉染手冊

轉染操作流程：
 
  1、細胞傳代：

轉染前24h內分離293T細胞至含10％胎牛血清的DMEM培養基 中進行傳代培養，接種密度如下：
         6孔板：0.5x10⁶細胞
         10cm培養皿：4.0x106細胞
         15cm培養皿：9.0x106細胞

2、轉染

轉染前將所有試劑置于室溫。

2.1質粒DNA的稀釋

在無菌試管中，用無血清的DMEM W / O酚紅培養基（濃度為10％）稀釋質粒DNA（ug）。病毒包裝體（psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重組質粒DNA的稀釋比例分別為4:2:1。
       

6孔板：200ul+3ug的DNA
        10cm培養皿：1ml+7-8ug的DNA
        15cm培養皿：2ml+11-12ug的DNA

   2.2 轉染復合體形成

將PEI（1ug/uL）加入已稀釋的總DNA中，PEI與DNA（ug）的混合比率為3:1。加入后立即渦旋混合。
      

 6孔板：9ul PEI復合體（1ug/ul）=9ug
        10cm培養皿：21ul PEI復合體（1ug/ul）=21ug
        15cm培養皿：33ul PEI復合體（1ug/ul）=33ug
將添加到細胞的DNA/ PEI的混合物在室溫下孵育15分鐘。

4、收獲轉染細胞

轉染后48小時內收獲轉染細胞/或病毒上清。
 
試劑的配制：
PEI（1ug/ul） Polysciences（CAT＃23966-2配制成儲液：)
1、將無內毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI，冷卻到室溫。
2、調整pH值至7.0，用0.22um的濾器過濾消毒，分裝后儲存在-20℃。工作液可保持在4℃

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