產(chǎn)品名稱 | MDCK 細胞專用培養(yǎng)基 | 貨號 | GOY-XP4334 |
規(guī)格 | 1*125ml/500ml | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
產(chǎn)品介紹
由團隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持MDCK細胞最佳的生長狀態(tài)。
本產(chǎn)品中已包含MDCK 細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于MDCK 細胞的培養(yǎng)。
產(chǎn)品主要成分
MEM 基礎培養(yǎng)基 445 ml
特級胎牛血清 50 ml
P/S青霉su-鏈霉su 5 ml
運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸
保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；-20℃，避光，保存6個月。
質(zhì)量控制
細胞復蘇?：
從液氮罐中取出凍存細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。
解凍后，將細胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動使細胞均勻分布。
放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
?細胞換液?：
吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。
加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細胞，以去除懸浮在細胞表面的碎片，重復幾次。
加入新的培養(yǎng)基。
?細胞傳代?：
當細胞長到80%~90%時，進行傳代。
吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。
加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細胞表面。
將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細胞變化。當細胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。
吹打細胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。
棄上清，加入適量的細胞培養(yǎng)液重懸細胞。
按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補加新鮮培養(yǎng)基。
做好標記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
?細胞凍存?：
選擇對數(shù)生長期的細胞進行凍存。
將細胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。
加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細胞。
將細胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。
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1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
