1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠原代主動脈平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | 貨號 | GOY-XP3201 |
規(guī)格 | 100mL/500mL | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
產(chǎn)品介紹
由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持大鼠原代主動脈平滑肌細(xì)胞最佳的生長狀態(tài)。
本產(chǎn)品中已包含大鼠原代主動脈平滑肌細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于大鼠原代主動脈平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)。
運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸
保存方法：按照對應(yīng)保存條件保存12個月，配置好的培養(yǎng)基2℃～8℃,保存2個月；
質(zhì)量控制
人膀胱移行細(xì)胞癌，UM-UC-3細(xì)胞 | JHH-2 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤，RT4細(xì)胞 | Hut-78 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人惡性黑色瘤細(xì)胞，A375-EGFP細(xì)胞 | SCC-9 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人原代肺成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | NCI-H82 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人鼻咽癌細(xì)胞系，6-B細(xì)胞 | BRL 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人鼻咽癌細(xì)胞，CNE-2Z細(xì)胞 | IEC-18 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人鼻咽癌細(xì)胞，CNE1細(xì)胞 | C918 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人鼻咽癌細(xì)胞，CNE2細(xì)胞 | MOLP-8 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人鼻咽癌細(xì)胞，CNE細(xì)胞 | LTPA 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
SCC-9人類鱗狀上皮舌癌細(xì)胞 | SH-SY5Y 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞，NCI-H460細(xì)胞 | 大鼠原代主動脈平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基MeWO 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人膽管癌細(xì)胞，HuH28細(xì)胞 | OCI-LY19 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人膽管癌細(xì)胞，QBC939細(xì)胞 | SW780 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色瘤細(xì)胞，OCM-1A細(xì)胞 | PSN-1 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞，NK-92細(xì)胞 | 人膀胱移行細(xì)胞癌，J82細(xì)胞 |
細(xì)胞復(fù)蘇?：
從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。
解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動使細(xì)胞均勻分布。
放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
?細(xì)胞換液?：
吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。
加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。
加入新的培養(yǎng)基。
?細(xì)胞傳代?：
當(dāng)細(xì)胞長到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。
加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細(xì)胞表面。
將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。
吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。
棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。
按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。
做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
?細(xì)胞凍存?：
選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。
將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。
加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。
將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。
