1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | NCI-H196 細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 | 貨號(hào) | GOY-XP4605 |
規(guī)格 | 1*125ml/500ml | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
產(chǎn)品介紹
由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持NCI-H196細(xì)胞最佳的生長(zhǎng)狀態(tài)。
本產(chǎn)品中已包含NCI-H196細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無(wú)需添加任何成分，可直接用于NCI-H196細(xì)胞的培養(yǎng)。
產(chǎn)品主要成分
RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基 445 mL
特級(jí)胎牛血清 50 mL
P/S青霉su-鏈霉su 5 mL
運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸
保存方法：按照對(duì)應(yīng)保存條件保存12個(gè)月，配置好的培養(yǎng)基2℃～8℃,保存2個(gè)月；
質(zhì)量控制
大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞9L/lacZ（種屬鑒定） | 原代卵巢顆粒細(xì)胞添加劑 |
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H1299(STR鑒定正確) | 原代肥大細(xì)胞添加劑 |
小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞帶熒光素酶RAW264.7+LUC（種屬鑒定） | 原代樹(shù)突狀（DC)細(xì)胞添加劑 |
MARC145 細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 | 原代破骨細(xì)胞添加劑 |
人肝癌細(xì)胞SNU-398(STR鑒定正確) | 原代NK細(xì)胞添加劑 |
小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞帶紅色熒光RAW264.7+RFP（種屬鑒定） | 原代精原細(xì)胞添加劑 |
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231(STR鑒定正確) | 原代內(nèi)膜細(xì)胞添加劑 |
人卵巢癌細(xì)胞HEY A8(STR鑒定正確) | 原代B淋巴細(xì)胞添加劑 |
人結(jié)直腸癌細(xì)胞胞P53R(STR鑒定正確) | 原代腎足細(xì)胞添加劑 |
人卵巢畸胎瘤細(xì)胞PA-1(STR鑒定正確) | 原代基底細(xì)胞添加劑 |
人口腔鱗狀細(xì)胞WSU-HN30(STR鑒定正確) | NCI-H196 細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基原代肝卵圓細(xì)胞添加劑 |
人胚腎細(xì)胞HEK-293(STR鑒定正確) | 原代CIK細(xì)胞添加劑 |
人膀胱癌細(xì)胞帶熒光素酶5637+LUC(STR鑒定正確) | 原代肌腱細(xì)胞添加劑 |
斑馬魚(yú)胚胎成纖維細(xì)胞pac2（種屬鑒定） | 原代淋巴細(xì)胞添加劑 |
小鼠肺泡巨噬細(xì)胞MH-S（種屬鑒定） | TU-138人喉癌細(xì)胞 |
細(xì)胞復(fù)蘇?：
從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。
解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。
放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
?細(xì)胞換液?：
吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。
加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。
加入新的培養(yǎng)基。
?細(xì)胞傳代?：
當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。
加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。
將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。
吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。
棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。
按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。
做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
?細(xì)胞凍存?：
選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。
將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。
加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。
將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過(guò)夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。
