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    • 乙酸激酶(ACK)紫外分光光度法檢測試劑盒

    乙酸激酶(ACK)紫外分光光度法檢測試劑盒

    參考價
    面議
    具體成交價以合同協(xié)議為準
    • 型號
    • 品牌其他品牌
    • 所在地上海市
    • 更新時間2022-04-28
    • 廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
    • 入駐年限10
    • 實名認證已認證
    • 產(chǎn)品數(shù)量10000
    • 人氣值317874
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    上海谷研實業(yè)有限公司主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的銷售,主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產(chǎn)品。銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司產(chǎn)品。    


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    貨號GOY-01S6930
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    操作步驟:

    實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。

    1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

    2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

    3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

    4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

    5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

    6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

    7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

    8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

    28.png 

    商品屬性:

    產(chǎn)品名稱

    乙酸激酶(ACK)紫外分光光度法檢測試劑盒

    規(guī)格

    50管/48樣

    檢測方法

    紫外分光光度法

    貨號

    GOY-01S6930

    商品介紹:

    測定意義

    ACK主要存在于微生物中,催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP,是細菌碳代謝和能量代謝的關鍵酶,尤其是在古細菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。

    測定原理:

    1)ACK催化乙酸鈉和ATP生成乙酰磷酸和ADP,(2)丙酮酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙酮酸,(3)乳酸脫氫酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+,(4)在340nm下測定NADH氧化生成NAD+速率,即可反映ACK活性。

    需自備的儀器和用品:

    紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

    實驗方法學:

    一、肝素的配制:

    市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤管壁,可抗凝人血35ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

    肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔510分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

    二、血液樣本的收集:

    全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

    1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

    2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA

    選擇抗凝的注意點:

    ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

    ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

    ③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

    ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

    用于測定。

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