ssDNA/RNA環化連接酶

商品屬性：

描述： ssDNA/RNA CircLigase 為熱穩定的 DNA/RNA 連接 酶，不依賴于 ATP，可催化單鏈 DNA 或單鏈 RNA 的分子內 環化。環化反應中，要求催化底物單鏈 DNA/RNA 具有 5’- 磷酸基團和 3’-OH 基團。對于大于 15nt 的單鏈底物，該酶 都能高效的連接。 

組分

活性定義：65°C 1h 條件下，催化 1pmol 5’-磷酸化的 ssDNA
底物環化，所需的酶量定義為 1Unit。
儲存：-20℃可保存 3 年。
反應實例
1. 按以下組分配制反應液
CircLigase (100 U/μl) 1 μl
5’磷酸化 ssDNA/RNA 10-100 pmol
10×CircLigase Buffer 2 μl
50mM MnCl2 1 μl
ddH2O Up to 20 ul
65°C 孵育 1h 進行環化反應。
2. 失活反應
反應結束后，可加入終濃度 10mM EDTA 終止反應。或采用
加熱方式 85℃ 10min 加熱失活。
使用注意事項：
(1) 環化底物 ssDNA 或 RNA 必須帶有 5’磷酸基團，3’端含有 OH。
(2) 環化體系中的 ATP 濃度高于 20μM 以上時會極大抑制環化效率，甚至導致環化失敗。因此建議底物為純化產物。
(3) 由于本酶提高了耐熱性，在 65℃條件下進行連接反應，在測試中 Betain 無益于連接效率提升。
(4) 本酶主要進行分子內環化連接，分子間的連接未檢測到。
(5) 本酶對 ssDNA 和 RNA 的環化效率高，多數情況下，90%以上的底物被環化。未被環化的 ssDNA 可通過加入 5U的 Exonuclease I，37°C 消化 15min 去除，以獲得高純度的環化 ssDNA。未環化的 ssRNA，將稍后給出去除方案。
(6) 本酶可以連接 15nt 以上的核苷酸，更長的產物連接參數，將稍后給出測試報告及 protocol。
(7) 對于連接底物量較少的實驗來講，推薦縮小體系，而不是減少酶的用量。在小體系實驗時注意體系的蒸發，可加入礦物油以防止蒸發。

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