中文名稱:ATPase染色液(鈣鈷法)
英文名稱:
產品規格:5×50ml
貨號:FS-X10018
產品介紹:
用途: 腺苷三磷酸酶染色 注意事項: 主要由孵育液、、硫化銨、陰性對照孵育液等組成。酶活性部位呈棕黑色或黑色。 儲存條件:4℃,避光,6個月 |
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
抗生溶桿菌皮質1抗體Human GLP2(Glucagon Like Peptide 2) 人前列腺E1(PGE1)免疫試劑盒
串珠鐮刀菌8號染色體開放閱讀框70抗體Human GLUT2(Glucose Transporter 2) 人前列腺D合成(PGDS)免疫試劑盒
氧化微桿菌胰羧肽E抗體Human GKN1(Gastrokine 1) 人前列腺D2(PGD2)免疫試劑盒
菌核青霉磷化角蛋白18抗體Human GLUT4(Glucose Transporter 4) 人前列腺A1(PGA1)免疫試劑盒
類芽孢桿菌20號染色體開放閱讀框112抗體Human GM-CSF Ab(Anti-Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor Antibody) 人前列環(PGI2)免疫試劑盒
明尼蘇達被毛孢10號染色體開放閱讀框88抗體Human Glyoxalase I(GLO1) 人前顆粒蛋白(PGRN)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌富含半胱C端蛋白1抗體Human GNβ1(G Protein Beta 1) 人前膠原C內肽增強子1(PCOLCE1)免疫試劑盒
海神弧菌E1A激活基因激蛋白2抗體Human GP-73(Golgi Protein 73) 人前膠原C端肽(PCP)免疫試劑盒
谷棒桿菌壁合成蛋白43抗體Human GDN(Glia Derived Nexin) 人前動力蛋白1(PROK1/EG-VEGF)免疫試劑盒
茯苓19號染色體開放閱讀框29抗體Human GH2(Growth Hormone 2) 人前病整合位點1(Pim1)免疫試劑盒
運動發酵單孢菌*磷化p21蛋白抗體Human GHAb(Anti-Growth Hormone Antibody) 人葡萄糖轉運蛋白4(GLUT4)免疫試劑盒
短裙竹蓀東北變種*磷化周期檢測點激2抗體Human GPⅡb/Ⅲa(Plaet Membrane Glycoprotein Ⅱb/Ⅲa complex) 人葡萄糖轉運蛋白3(GLUT3)免疫試劑盒
金黃殼囊孢磷化鈣/鈣調依賴蛋白激2α抗體Human GHITM(Growth Hormone Inducible Transmembrane Protein) 人葡萄糖轉運蛋白1(GLUT1)免疫試劑盒
乳桿菌磷化周期依賴性激2抗體Human GADL1(Glutamate Decarboxylase Like Protein 1) 人葡萄糖依賴性胰島釋放多肽(GIP)免疫試劑盒
長枝木霉磷化周期檢測點激1抗體Human GA(Glycated Albumin) 人葡萄糖激調節蛋白(GKRP)免疫試劑盒
黑平188磷化P27抗體/周期依賴激抑制劑抗體Human GABA(Gamma-aminobutyric acid) 人葡萄糖激(GCK)免疫試劑盒
蛹蟲草Cordyceps│militaris 質量規格:>98%,分子生物學級Bκ 輕肽基因增強子核因子抑制因子ε試劑盒車葉草
蝕脈鐮孢Fusarium│vasinfectum 質量規格:>99%,BRB群鏈球菌多糖抗體試劑盒草
柔嫩艾美耳球蟲Eimeria│tenella 質量規格:>98%,BCB-淋巴趨化因子1試劑盒橙黃決明-6-葡萄糖
ATPase染色液(鈣鈷法)金黃殼囊孢 L-蘇糖二單加氧3
暗孢毛殼 四甲基羅丹明-5(6)-異硫酯狀瘤病16型IgM抗體
白黑鏈霉 4-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)磷肌
灰樹花 N-叔丁氧羰基-N-甲基-L-酪二環己鹽可溶性低密度脂蛋白受體相關蛋白1
植物乳桿 基環戊二烯鉑(IV)轉化受體電位陽離子通道亞家族M成員7
沼澤紅假單胞 2-氮雜雙環[3.3.0]辛烷-3-羧芐酯 鹽鹽組H1受體
枯草芽孢桿 2-二環己基膦-2′,4′,6′-三異基聯苯金(I)雙(三氟磺酰)亞融合蛋白
不動桿 2,5-噻吩二甲去泛化
Arthrobacter 乙酯去泛化
德氏乳桿保加利亞亞種 (R)-N-叔丁氧羰基-3-代甲酯二氫生物蝶呤
黃桿 環己基化鎂泛蛋白
新城疫病 1-亞硝基吡咯烷蘋果脫氫
枯草芽孢桿 3,4-環氧-1-CC趨化因子受體3
沙阿霉鏈霉 3,6,9-三氧雜十一烷-1,11-二α-糖
棲沙鹽水孢 反式-3-己烯-1-輪狀病抗體