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    • PAO多胺氧化酶檢測試劑盒可見分光光度法

    PAO多胺氧化酶檢測試劑盒可見分光光度法

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    具體成交價以合同協議為準
    • 型號
    • 品牌其他品牌
    • 所在地上海市
    • 更新時間2022-04-11
    • 廠商性質經銷商
    • 入駐年限8
    • 實名認證已認證
    • 產品數量9988
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    貨號FS-01S63360
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    PAO多胺氧化酶檢測試劑盒可見分光光度法 產品詳情

    公司產品僅用于科研提供的生化試劑盒,質量信得過產品,售后完善。服務于高校及免疫學科研單位,竭誠為您提供更周到的服務更優質的產品。

    產品名稱:PAO多胺氧化酶檢測試劑盒可見分光光度法

    規格:50管/48樣

    檢測方法:可見分光光度法

    貨號:FS-01S63360
    商品介紹:

    測定意義

    多胺氧化酶是催化生物體內多胺氧化的關鍵酶,通過調節體內多胺水平和生成物的濃度,參與各種植物體對逆境脅迫的反應和生長發育過程。

    測定原理:

    PAO催化多胺氧化產生過氧化氫,在過氧化氫酶存在的條件下與底物顯色,在550nm下有特征吸收峰,通過測定吸光值增加速率來反映PAO活性。

    需自備的儀器和用品:

    分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

    試劑的組成和配制:

    提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

    試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

    試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

    試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

    試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
    QQ截圖20220307153604.png

    粗酶液提取:

    1、細胞或組織樣品的制備:

    培養細胞:先收集細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細胞數量(104個):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1ml提取液),超聲波破碎細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

    2、血清(漿)樣品:直接檢測。

    操作步驟:

    實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

    1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

    2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

    3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

    4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

    5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

    6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

    7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

    8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

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