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    • 二磷酸核酮糖羧化酶測試盒100管/96樣

    二磷酸核酮糖羧化酶測試盒100管/96樣

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    • 型號
    • 品牌其他品牌
    • 所在地上海市
    • 更新時間2022-04-21
    • 廠商性質經銷商
    • 入駐年限8
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    二磷酸核酮糖羧化酶測試盒100管/96樣 產品詳情

    產品屬性:  

    產品名稱

    檢測方法

    規格

    貨號

    二磷酸核酮糖羧化酶測試盒100管/96樣

    微量法

    100管/96樣

    BJ-01S10183

    商品介紹:

    測定意義:

    核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(Rubisco, EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一個關鍵酶,既控制著CO2的固定,同時又制約著碳素向Calvin循環和光呼吸循環分流,其活性的大小直接影響著光合速率。

    測定原理:

    1)在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)與1分子的CO2結合,產生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA);(2)PGA可通過外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用,產生甘油醛-3-磷酸,伴隨著NADH氧化生成NAD+;(3)在340 nm NADH有特征吸收峰,而NAD+沒有此吸收峰,因此測定340nm吸光度下降速率可以代表Rubisco的羧化酶活性。

    需自備的儀器和用品:

    可見-紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

    QQ截圖20220307153443.png 

    注意事項:

    ①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

    ②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

    ③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

    ④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

    ⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

    ⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。

    ⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

    ⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

    ⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用

    樣品制備:

    1). 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,體積可達2.000ml。

    2). 過濾混濁溶液。

    3). 除去樣品中的CO 2 (果糖含量測試盒說明書過過濾)。

    4 ). 果糖含量測試盒說明書過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調至8.0。

    5 ). 調整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。

    6 ). 用空白樣品做對照測定有色樣品(如有必要調整PH值至8.0)。

    7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經稀釋或體積更大的樣品。

    8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。

    9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質的樣品去蛋白。

    10).含脂肪的樣品用熱水提取。

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    操作流程:

    1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

    2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

    3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

    4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

    6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

    7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

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