HAT Media Supplement說明書

公司產品具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產品名稱：HAT Media Supplement說明書

貨號：BJ-01R3338

規格：10ml

分類：培養基

儲存條件：—20℃,避光,12個月

用途：HAT培養基添加劑,是次、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷的混合物,適用于雜交瘤選擇和細胞培養。

注意事項：無菌溶液,主要由次、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷。10ml可制備500mL培養基。

注意事項：

1、盡注意無菌操作，避免污染。

2、避免反復凍融。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

標準溶液的配制：

1.直接配制法    對于純凈的物質(稱做基準物質)可準確進行稱量，用蒸餾水溶解后，轉移到一定容積的容量瓶中稀釋至標線，溶液的準確濃度可以直接計算出來。溶質的純度、性質等對濃度有較大影響，為此，對用來直接配制標準溶液用的基準物質必須具備以下條件：

(1)物質的純度要高，含量不得低于99.9％，雜質的含量應當少到可以忽略的程度。

(2)物質的分子組成應與其化學式*符合，包括結水合物中的結品水含量也必須與其化學式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性質穩定，貯蔵時應不發生變化，不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分，不易風化潮解和被空氣氧化，烘干時不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準物質以減小稱量誤差。

2.間接配制法    凡不符合基準物質條件的物質，可先配制成近似所需濃度的溶液，再用基準物質溶液或能與其發生定量反應的標準溶液進行滴定，求其準確濃度，這種通過滴定來確定準確濃度的操作叫做“標定”。間接法配制近似濃度溶液時不需用分析天平稱量和容量瓶配制，可用臺秤、量筒等器皿。將稱好的物質轉移到干凈的試劑瓶中，先加少量蒸餾水將其溶解，繼續用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數試劑不符合基準物的條件，故間接法配制標準溶液是經常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質；濃鹽酸因易揮發而無法準確稱量；不易得到分析純級的試劑等，這些物質的標準溶液須用間接法來配制，經標定后再做標準溶液使用。

標準溶液的標定：

1.用基準物質標定法

(1)多次稱量法    用減重法精密稱取幾份(如2～3份)基準物質，分別倒入編號的干凈錐形瓶(或燒杯)內，各加少量蒸餾水溶解，再加指示劑后分別用待標定溶液滴定至等當點，各自記錄所消耗待標定溶液的體積，結合基準物質的重量分別算出溶液的準確濃度，最后取平均值做為標準溶液的濃度。

(2)移液管法    精密稱取一份基準物質，在干凈的小燒杯內加少量蒸餾水溶解，順玻棒全部轉移到已校正好的容量瓶中，多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中，最后配成一定體積的溶液，混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉移至錐形瓶中，加指示劑后用待標定溶液滴定至等當點，每次做好記錄，根據所消耗待標定溶液的體積，結合基準物質的重量，分別算出溶液的準確濃度取平均值做為標準溶液的濃度。

2.比較法標定    如果待標定溶液能與某標準溶液進行反應，可吸量一定體積的某標準溶液，用待標定溶液滴定，或吸量一定體積的待標定溶液，用某標準溶液滴定。根據兩溶液所消耗的毫升數及某標準溶液的濃度，按N1V1＝N2V2式可以計算出待標定溶液的準確濃度。這種用標準落液來測定待標定溶液準確濃度的過程稱為“比較法”標定。如果某標準溶液的濃度由于某些原因不夠準確時，就會直接影響待標定溶液濃度的準確性，顯然比較法不如用基準物質直接標定的方法精確，但比較法簡便易行。

標定完畢，蓋緊標準溶液試劑瓶塞，瓶簽上注明標準溶液名稱、準確濃度和日期等。

Radix glycyrrhizae preparata灸甘草染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周procollagen type IIA  Ⅱ型膠原α1抗體 規格: 0.2mlDDB1  DNA損傷結合蛋白1抗體 規格: 0.2ml

Germiston Virus杰米斯頓病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy5  Cy5標記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規格: 0.1mlSkp2/skp2 p45  細胞S期激相關蛋白2抗體 規格: 0.1ml

Epidemic Encephalitis B乙型腦炎（乙腦）病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-human IgM/RBITC  羅丹明標記的兔抗人IgM 規格: 0.3mlphospho-HRH1(Ser398)  磷酸化組胺受體H1抗體 規格: 0.1ml

Fructus cannabis火麻仁LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周TRAF1  瘤壞死因子受體相關因子1抗體 規格: 0.2mlDog IgM/Cy3  Cy3標記的兔抗犬IgM抗體 規格: 0.1ml

Proteus penneri彭氏變形LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ANKRD50  錨蛋白重復結構域蛋白50抗體 規格: 0.2mlMouse Anti-Goat IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標記的小鼠抗羊IgG 規格: 0.1ml

Madurella mycetomatis足馬杜拉分枝探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周NUDC  細胞核分離基因C蛋白抗體 規格: 0.2mlPhospho-FGFR1 (Tyr307)  磷酸化堿性成纖維細胞生因子受體1抗體 規格: 0.1ml

Brome Streak Mosaic Virus(BStMV)雀麥草條紋花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HRH3/GPCR97  組織胺H3受體抗體 規格: 0.1mlPCDHB4  原鈣粘蛋白β4抗體 規格: 0.2ml

Canine Influenza Virus H1N1（CIV-H1N1）犬流感病毒H1N1型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-cdc25A (Ser178)  磷酸化細胞分裂周期蛋白25抗體 規格: 0.1ml

Bovine Norovirus(BoNoV)牛諾如病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-rat IgG/PE  PE標記的兔抗大鼠IgG 規格: 0.1ml

Theileria lowenshuni呂氏泰勒蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周WEE1 protein  WEE1蛋白抗體 規格: 0.1ml

HAT Media Supplement說明書細菌活性檢測試劑盒-CCK8250T|500T|1000T

細菌活性檢測試劑盒-AlamarBlue250T|500T|1000T

CFSE細胞增殖與毒性檢測試劑盒500T

細胞活性檢測試劑盒-綠色熒光500T|1000T

酵母活性檢測試劑盒-AlamarBlue250T|500T|1000T

CCK-8反應終止液500T|1000T

細胞周期檢測試劑盒20T|50T|100T

Annexin V-FITC/PI雙染法細胞凋亡檢測試劑盒Cell proliferation and toxicity detection kit20次/50次/100次

Tunel細胞凋亡檢測試劑盒（FITC）Tunel cell apoptosis detection kit（FITC）10次/20次/50次

轉染試劑0.75ml/1ml/1.5ml

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩定轉染細胞的篩選

1）     轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。

5） 之后更換正常培養基培養即可。