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    EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYB培養

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    • 所在地上海市
    • 更新時間2017-09-06
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    EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYB培養來源可靠(源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等品牌),活力>95%,貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細胞、新鮮原代細胞、原代細胞的分子學實驗等提供全程服務。我司擁有專業的實驗室,可無菌操作并提供相關科研項目解決方案以及實驗服務。
    EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYB培養 產品詳情

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    產品名稱

    生長特性

    貨期

    EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYB培養

    懸浮生長

    35

    細胞名稱  EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYB培養
    形態特性   淋巴母細胞樣
    生長特性   懸浮生長
    特征特性    該細胞系來源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉化的方法建立。
    培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
    傳代方法   1:2傳代;5-6天一次
    傳代情況  P2
    凍存條件  基礎培養基+5%DMSO+20%FBS 
    支原體檢測  熒光法(- 
    STR   -
    同工酶

    染色體

    使用權限 A
    EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYB培養凍保存方法一:冷凍管置于4300分鐘→(-2030分鐘*)→-8016~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。 
    冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3–80以下,再放入液氮槽期儲存。-20不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80冰箱中,但存活率稍微降低一些。 
    迄今為止,公司收錄背景資料清晰,細胞活力狀態良好的細胞株1420株,其中絕大部分是近年來從美國ATCCNIH分批引進的細胞種子,少部分來自全國各地細胞研究所,細胞來源可靠,背景資料清晰,代數年輕,活力好。凍保存方法一:冷凍管置于4300分鐘→(-2030分鐘*)→-8016~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。 
    EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYB培養復蘇操作要點:
    1)將培養基在37水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
    2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
    3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
    4800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
    5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
    6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
    EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYB培養操作步驟:
    1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量*,使*的量能蓋住細胞,37孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止*作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
    2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37溫箱培養。
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