人晶體上皮細胞永生系(SRA01/04)
細胞培養步驟
1)培養基及培養凍存條件準備：
1.準備 RPIVM-1640 培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號 21875-091);北美胎牛血清，10% ; PS1%。
2.培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
2)細胞處理：
1.復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入l0cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
下面T25瓶為例；
細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml*，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。lOOOrpm離心4分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。將凍存置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人晶體上皮細胞永生系(SRA01/04)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2ml*培養基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養液后吹勻。
3.細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。
人晶體上皮細胞永生系(SRA01/04)注意事項：
收到細胞后，若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注
意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
