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產品名稱 | BJ5183-AD-1 感受態細胞 100ul*10 |
包裝 | 100ul*10 |
分類 | 克隆感受態細胞 |
培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15小時。
shēng huà shì jì 3-碘苯甲酸 容量: 2~8℃,避光 25克
shēng huà shì jì 3-苯丙酸 容量: 100克
shēng huà shì jì 3-* 容量: 保存:-20℃ 1克
shēng huà shì jì 3-氨基異丁酸 容量: RT 5克
shēng huà shì jì 3-氨基酚 容量: 保存:-20℃ 100毫克
shēng huà shì jì 3-氨基丁酸 容量: 1公斤
shēng huà shì jì 3-氨基吡啶 容量: 1克
BJ5183-AD-1 感受態細胞 100ul*10shēng huà shì jì 3-氨基苯乙酮 容量: 保存:-20℃ 500ul
shēng huà shì jì 3-氨基苯二甲酰肼 容量: 10克
shēng huà shì jì 3-氨基-9-乙基咔唑 容量: 10克
shēng huà shì jì 3α羥基類固醇脫氫酶 容量: 保存:-20℃,避光 1毫克
shēng huà shì jì 3MM色譜層析濾紙 容量: 5克
shēng huà shì jì 3C蛋白酶 容量: 25克
shēng huà shì jì 35mm玻底培養皿 容量: 保存:-20℃ 1KU
shēng huà shì jì 300ul吸頭 容量: 250毫克
shēng huà shì jì 30%純度卵黃鹽水 容量: 1米
shēng huà shì jì 3-[(3-*氨丙基)二甲基氨基]-2-羥基-1-丙磺酸 容量: 保存:-20℃ 2×0.25毫升
shēng huà shì jì 3-[(3-*氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸 容量: 保存:-20℃ 2×1毫升
shēng huà shì jì 3.5%純度氯化三糖鐵瓊脂 容量: 2~8℃ 100毫升
shēng huà shì jì 3.0ml凍存管 容量: 2~8℃ 1克
abl ELISA Kit,48T/96T 規格: 48T/96T
Orexin A 人阿立新A 規格: 48T/96T
AGPs 人阿拉伯半乳糖蛋白 規格: 48T/96T
POMC 人阿黑皮素原 規格: 48T/96T
POMC 人阿黑皮素原 規格: 48T/96T
AO 人吖啶橙 規格: 48T/96T
IFN-ω 人ω干擾素 規格: 48T/96T
Pγ 人γ肽 規格: 48T/96T
GGT 人γ谷氨酰轉移酶 規格: 48T/96T
γ-ECS 人γ谷氨酰半*合成酶 規格: 48T/96T
IFI16/p16 人γ干擾素誘導蛋白16/p16 規格: 48T/96T
GABA 人γ氨基丁酸 規格: 48T/96T
IFN-γ 人γ 干擾素 規格: 48T/96T
β-TG 人β血小板球蛋白/β血栓環蛋白 規格: 48T/96T
BTC 人β細胞素 規格: 48T/96T
人β乳糖蛋白抗體IgG ELISA Kit,48T/96T 人β乳糖蛋白抗體IgG ELISA Kit,48T/96T 規格: 48T/96T
β-Lg 人β乳球蛋白 規格: 48T/96T
β-OHB 人β羥丁酸 規格: 48T/96T
βGD 人β葡萄糖醛酸苷酶 規格: 48T/96T
β-glucosidase 人β葡糖苷酶 規格: 48T/96T
β-naphthol 人β萘酚 規格: 48T/96T
BLI 人β內酰胺酶抑制劑 規格: 48T/96T
β-lactamase 人β內酰胺酶 規格: 48T/96T
β-EPR 人β內啡肽受體 規格: 48T/96T
β-EP 人β內啡肽 規格: 48T/96T
β-Cat 人β連環蛋白/聯蛋白 規格: 48T/96T
注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟:
1.取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態細胞為例。
2.待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇
5.根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養,37℃培養12-16小時。