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| 產(chǎn)品名稱(chēng) | Rosetta 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 |
| 包裝 | 100ul*10 |
| 分類(lèi) | 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
FⅡ 兔子*Ⅱ 規(guī)格： 48T/96T
TR 兔子*受體 規(guī)格： 48T/96T
BNP 兔子腦鈉素/腦鈉尿肽 規(guī)格： 48T/96T
ES 兔子內(nèi)皮抑素 規(guī)格： 48T/96T
eNOS-3 兔子內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3 規(guī)格： 48T/96T
ET-1 兔子內(nèi)皮素1 規(guī)格： 48T/96T
ET-1 兔子內(nèi)皮素1 規(guī)格： 48T/96T
IgM 兔子免疫球蛋白M 規(guī)格： 48T/96T
IgG 兔子免疫球蛋白G 規(guī)格： 48T/96T
IgE 兔子免疫球蛋白E 規(guī)格： 48T/96T
IgA 兔子免疫球蛋白A 規(guī)格： 48T/96T
Sam 兔子可溶性粘附分子 規(guī)格： 48T/96T
Rosetta 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 sVCAM-1 兔子可溶性血管細(xì)胞粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T
sEPCR 兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體 規(guī)格： 48T/96T
sICAM-1 兔子可溶性細(xì)胞間粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T
sCD40L 兔子可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體 規(guī)格： 48T/96T
sP-selectin 兔子可溶性P選擇素 規(guī)格： 48T/96T
sE-selectin 兔子可溶性E選擇素 規(guī)格： 48T/96T
ANGA 兔子抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體 規(guī)格： 48T/96T
MIP-5 兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白5 規(guī)格： 48T/96T
MIP-1α/CCL3 兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α 規(guī)格： 48T/96T
Collagenase II 兔子膠原酶II 規(guī)格： 48T/96T
Collagenase I 兔子膠原酶I 規(guī)格： 48T/96T
bFGF 兔子堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 規(guī)格： 48T/96T
T4 兔子甲狀腺素 規(guī)格： 48T/96T
TIMP-1 兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1
shēng huà shì jì 氧化鐠 容量： RT 10克
shēng huà shì jì 氧化釹 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 氧化鎂 容量： 100克
shēng huà shì jì 氧化鋁H 容量： 100克
shēng huà shì jì 氧化鋁G 容量： RT 250克
shēng huà shì jì 氧化鋁60GF425 容量： RT 10克
shēng huà shì jì 氧化鋁60G 容量： 1公斤
shēng huà shì jì 氧化鋁 容量： 2～8℃ 10毫克
shēng huà shì jì 氧化鑭 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 氧化鈧 容量： RT，避光 10克
shēng huà shì jì 氧化金 容量： RT 500毫升
shēng huà shì jì 氧化鎵 容量： RT 10克
shēng huà shì jì 氧化鉿 容量： RT 5克
shēng huà shì jì 氧化鋯 容量： 10克
shēng huà shì jì 氧化鈣 容量： 500克
shēng huà shì jì 氧化釓 容量： 100克
shēng huà shì jì 氧化發(fā)酵試驗(yàn)（OF）培養(yǎng)基 容量： 25克
shēng huà shì jì 氧化鉺 容量： 10克
shēng huà shì jì 氧化銩 容量： 2～8℃ 25毫克
shēng huà shì jì 氧化鏑 容量： 25克
shēng huà shì jì 氧化鉍 容量： RT，避光 25克
shēng huà shì jì 羊毛脂 容量： 100克
shēng huà shì jì 羊膽鹽 容量： RT 5克
規(guī)格： 48T/96T
注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
