結腸癌轉基因細胞：RKO-AS45-1

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

產品屬性：

產品介紹：

名稱    結腸癌轉基因細胞：RKO-AS45-1 

別稱RKO-AS-45-1; RKOAS451; RKO_AS45

種屬人類

年齡（性別）不詳

組織來源結腸癌，整合起動GADD45a表達載體的CMV啟動子

生長特性貼壁細胞

細胞形態(tài)上皮細胞樣

背景描述人的cDNA中編碼GADD45的開放閱讀框克隆到表達載體pCMV.3中，轉染結腸癌細胞RKO，建立了RKO-AS45-1細胞株。RKO-AS45-1細胞含有穩(wěn)定整合巨細胞病毒(CMV)啟動子的表達載體，RKO-AS45-1細胞系和它的母系RKO一起可用于GADD45對DNA修復、凋亡和藥物敏感性研究。

生物安全等級2 [Cells Contain CMV viral sequences]

生長培養(yǎng)基MEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

基因表達情況p53+ (underexpressed)

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3. 預熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

小鼠 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 VEGF121b / VEGF-A 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 SCN2B 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 ILT6 / LILRA3 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人

結腸癌轉基因細胞：RKO-AS45-1 改良亞硫酸鹽瓊脂 Sulfite Agar，modified 250g

300U 蝦堿性 Shrimp Alkaline Phosphatase  -20℃保存

2 ug SD1211-chip-Ctr SD1211-chip-Ctr 低溫運輸，-20℃保存

1瓶 NCI-H466細胞株 NCI-H466 低溫運輸和保存

NUSAP1  核仁和紡錘體相關蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

RHOBTB1  Rho相關結構域BTB蛋白質1抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-CHEK1 (Ser345)  磷酸化細胞周期檢測點激1抗體 規(guī)格: 0.1ml

PI3K/PI3 kinase p85 alpha subunit  磷脂酰肌醇激抗體 規(guī)格: 0.1mlTRIM7/RNF90  糖原生成素相互作用蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

RPLP2  酸性核糖體磷蛋白P2抗體 規(guī)格: 0.2ml

LGALS3BP  可溶性半糖凝集素3結合蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-rat IgM  兔抗大鼠IgM 規(guī)格: 1mg

NRAS  原基因N-Ras抗體 規(guī)格: 0.1ml