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名稱 | ME-180 (人子宮頸表皮癌細胞) (STR鑒定正確) |
別稱 | Me-180; ME 180; ME180 |
種屬 | 人類 |
年齡（性別） | 女性，66歲 |
組織來源 | 宮頸表皮樣癌網膜轉移灶 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
背景描述 | ME-180細胞來源于一個細胞集落不規(guī)則沒有顯著角質化的侵染性鱗狀細胞癌。單層培養(yǎng)的ME-180細胞間可以觀察到帶狀連接，也注意到有細胞質張力絲。1970年，發(fā)現(xiàn)支原體污染并去除。TNF-α抑制ME-180細胞的生長；ME-180細胞含有人乳頭瘤病毒DNA，與HPV-39的同源性高于HPV-18。 |
生物安全等級 | 2 |
生長培養(yǎng)基 | McCoy's 5A＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時間 | ~36小時 |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
致瘤性 | Yes, in nude mice; forms well differentiated epidermoid carcinoma (grade I). |
抗原表達情況 | Blood Type A; Rh+; HLA A1, A11, B5(+/-), B40 |
基因表達情況 | Oncogenes: p53+; pRB+ |
保藏機構 | ATCC; HTB-33 |
細胞傳代：
1. ME-180人子宮頸表皮癌細胞試驗準備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細胞從壁上脫落下來為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細胞，細胞計數(shù)后選擇 0.8X106 個細胞加入一個 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉染。
細胞轉染：
1. 轉染試劑的準備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA 質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。
磷suan化Src原癌基因封閉多肽 | 腸道腺病毒41型PCR檢測試劑盒 |
馬流感病毒H3N8亞型RT-PCR試劑盒 | 二氫嘧啶脫氫mei[NADP+]ELISA試劑盒 |
人白介su1β轉換mei(ICE) 試劑盒 ELISA | meiELISA試劑盒 |
人β-肌動蛋白(β-actin)試劑盒ELISA | 防御suβ126ELISA試劑盒 |
人堿性胎兒蛋白(BFP)檢測試劑盒elisa | 端粒保護蛋白1ELISA試劑盒 |
人補體片段4d(C4d)ELISA試劑盒 | S100鈣結合蛋白PELISA試劑盒 |
跨膜蛋白Sema3C封閉多肽 | 腸道病毒EV/柯薩奇病毒CA核suan檢測試劑盒 |
骨橋蛋白/分泌型磷蛋白1封閉多肽 | 牛皰疹病毒1型PCR試劑盒 |
Cy5標記人血白白 | 豬圓環(huán)病毒/偽狂犬病毒(PCV/PRV)核suan檢測試劑盒 |
中斷位點蛋白STIL封閉多肽 | 偏肺病毒PCR檢測試劑盒 |
DCN1樣蛋白2封閉多肽 | 摩氏摩根菌PCR檢測試劑盒 |
透明質suan結合蛋白2 27kDa輕鏈封閉多肽封閉多肽 | ME-180人子宮頸表皮癌細胞牛型放線菌PCR檢測試劑盒 |
TRIM35蛋白封閉多肽 | 牛皰疹乳頭炎病毒PCR試劑盒 |
MAPK/ERK激mei1封閉多肽 | 綿羊源性成分PCR試劑盒 |
微管相關蛋白2封閉多肽 | 摩氏摩根菌PCR檢測試劑盒 |
細胞培養(yǎng)實驗基本操作：
①進無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內的培養(yǎng)液成分如蛋白質等燒焦后會產生有害物質，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時，應專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細胞交叉污染：所有從別處轉來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復蘇早期凍存的細胞使用。
