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名稱(chēng) | MV-4-11 (人髓性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞) (STR鑒定正確) |
種屬 | 人類(lèi) |
年齡（性別） | 10歲 |
組織來(lái)源 | 外周血 |
生長(zhǎng)特性 | 懸浮細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 淋巴母細(xì)胞樣 |
生物安全等級(jí) | 1 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | IMDM＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1×10^5-1×10^6個(gè)/mL |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-9591 DSMZ; ACC-102 |
細(xì)胞傳代：
1. MV-4-11人髓性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來(lái)為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開(kāi)。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
磷suan化埃茲蛋白封閉多肽 | 馬腺病毒PCR檢測(cè)試劑盒直銷(xiāo) |
輪狀病毒通用RT-PCR試劑盒（停） | 泛核蛋白2ELISA試劑盒 |
人白介su28A(IL-28A/IFN-λ2)試劑盒ELISA | 多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移mei13ELISA試劑盒 |
人α-烯醇化mei(ENO1/ENO1L1/MBPB1/MPB1)檢測(cè)試劑盒elisa | 脫氧皮質(zhì)酮ELISA試劑盒 |
人補(bǔ)體因子D(CFD)ELISA試劑盒 | 多巴胺β羥化meiELISA試劑盒 |
人表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白7(EGFL7)試劑盒ELISA | PL12抗體/抗丙氨酰tRNA合成meiELISA試劑盒 |
RAP1GAPmei激活蛋白封閉多肽 | 肉毒桿菌毒suEPCR檢測(cè)試劑盒 |
標(biāo)簽陽(yáng)性對(duì)照 (11 Tags, 41kDa)全細(xì)胞裂解液 | 牛巨細(xì)胞病毒PCR試劑盒 |
C型凝集su結(jié)構(gòu)域家族5成員A封閉多肽 | 豬瘟病毒/高致病性豬藍(lán)耳病毒/口蹄疫病毒通用型（CSFV/PRRSV-M/FMDV-U）核suan檢測(cè)試劑盒 |
植物延展su-β | 禽腦脊髓炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
DENND4A蛋白封閉多肽 | 木霉屬通用PCR檢測(cè)試劑盒 |
過(guò)量位點(diǎn)蛋白1封閉多肽 | MV-4-11人髓性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞牛皰疹病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 |
自噬相關(guān)蛋白4A封閉多肽 | 牛流行熱病毒RT-PCR試劑盒 |
LETM1蛋白封閉多肽 | 牡丹皮探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒 |
異質(zhì)核糖核蛋白M3-M4封閉多肽 | 木瓜特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒 |
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無(wú)菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開(kāi)始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開(kāi)或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過(guò)燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼，以防退火；燒過(guò)的器械要冷卻后才能使用；已吸過(guò)培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過(guò)火焰是也不能時(shí)間太長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過(guò)早開(kāi)瓶，開(kāi)瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過(guò)早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話(huà)，咳嗽以防止來(lái)自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專(zhuān)管專(zhuān)用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來(lái)的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。
