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    • 丙酮酸脫氫酶(PDH)可見分光光度法

    丙酮酸脫氫酶(PDH)可見分光光度法

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    • 型號(hào)
    • 品牌其他品牌
    • 所在地上海市
    • 更新時(shí)間2022-04-27
    • 廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
    • 入駐年限10
    • 實(shí)名認(rèn)證已認(rèn)證
    • 產(chǎn)品數(shù)量10000
    • 人氣值319222
    產(chǎn)品標(biāo)簽

    丙酮酸脫氫酶PDH可見分光光度法

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    貨號(hào)GOY-01S6578
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    丙酮酸脫氫酶(PDH)可見分光光度法 產(chǎn)品詳情

    操作步驟:

    實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

    1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

    2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

    3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

    4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

    5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

    6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

    7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

    8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

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    商品屬性:

    產(chǎn)品名稱

    丙酮酸脫氫酶(PDH)可見分光光度法

    規(guī)格

    50管/48樣

    檢測方法

    可見分光光度法

    貨號(hào)

    GOY-01S6578

    商品介紹:

    測定意義

    PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成-TPP,把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。

    測定原理

    PDH催化丙酮酸脫氫,同時(shí)還原WST-8產(chǎn)生黃色物質(zhì),從而導(dǎo)致450nm光吸收的增加。

    可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

    實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

    一、肝素的配制:

    市售肝素凍干粉140單位/mg1克瓶裝,每瓶140000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤管壁,可抗凝人血35ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

    肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔510分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

    二、血液樣本的收集:

    全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

    1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

    2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA

    選擇抗凝的注意點(diǎn):

    ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

    ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

    ③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

    ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

    用于測定。

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    2-乙蒽醌 97%血小板源性生長因子C抗體BMP11  骨形態(tài)發(fā)生蛋白11抗體

    鄰氧 CP,97%血小板源性生長因子D(脊髓源性生長因子B)BMP10  骨形態(tài)發(fā)生蛋白10抗體

    對(duì)氧 97.0%非典型蛋白激C特定相互作用蛋白抗體BMP1  骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切抗體

    4-異酯 98%原鈣粘蛋白13抗體BMI-1/PCGF4  組蛋白相關(guān)Bmi1抗體

    3,4-二異酯 97% 26S蛋白調(diào)節(jié)亞型抗體Bmf/Bcl2 modifying factor  Bcl2蛋白修飾因子抗體

    3-氨-4-戊  98%原鈣粘蛋白β11抗體BMAL1  芳香烴受體核轉(zhuǎn)位蛋白樣1抗體

    2-酚 99%軸周蛋白PRX抗體Blood Group Lewis a  血型抗原Lewis A抗體

    對(duì) 98%豬藍(lán)耳病病GP5蛋白抗體Blood Group Lewis a  血型Lewis a抗體

    2- 98%p21激活激1抗體Blood Group Kell Antigen/CD238  凱爾血型糖蛋白CD238抗體

    1,4-二 97%蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)抗體Blood Group Antigen Precursor  血型抗原前體蛋白抗體

    2,2'-二硫雙(5-硝吡) 97%脯氨酰羥化抗體BLNK  B淋巴連接蛋白抗體

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