大鼠肺大動脈內(nèi)皮細胞說明書

 細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。

產(chǎn)品描述：提供的原代細胞均來自新鮮組織，提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度?？萍继峁┑募毎袠藴实蔫b定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、科技售后服務標準。

      保存和應用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用.

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培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

阿須貝氏Ashby培養(yǎng)基千金藤素 分析標準品,≥98%(HPLC)含225ml7.5%肉湯均質(zhì)袋pUNO1-hCARM1

根瘤菌培養(yǎng)基 YM鵝去氧膽酸 99%含100mlBolton肉湯均質(zhì)袋pUNO1-hP1a

根瘤菌培養(yǎng)基Ⅱ基礎秋水仙堿 98%馬鈴薯-蔗糖培養(yǎng)基pUNO1-hP10d

硅酸鹽細菌培養(yǎng)基秋水仙堿 分析標準品，≥99%(HPLC)無機鹽瓊脂培養(yǎng)基pUNO1-hP2a

固氮莖瘤根瘤菌培養(yǎng)基秋水仙堿 用于植物細胞培養(yǎng), ≥98% (HPLC)卵黃雙抗培養(yǎng)基（EPV）pUNO1-hP3

馬培養(yǎng)基菊苣酸 分析標準品，≥98%礦物鹽瓊脂pUNO1-hP3rev

高氏合成一號瓊脂培養(yǎng)基卡拉膠 試劑級MIU培養(yǎng)基pUNO1-hP4a

聯(lián)合固氮菌培養(yǎng)基雷公藤紅素  98%改良Skirrow瓊脂平板pUNO1-hP5a

馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基不含氯霉素白屈菜紅堿 分析標準品，>98% CIN-1瓊脂平板9cmpUNO1-hP6a

麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基（＋）－兒茶素  98%營養(yǎng)肉湯（20944.1-2007紡織品標準）pUNO1-hP6rev

大鼠肺大動脈內(nèi)皮細胞說明書醇中1,2－二氯苯標樣 濃度范圍:1034±18ug/ml，分析標準品 6×DNA上樣緩沖液  Loading Buffer  維他列汀(維達列汀)Mouse TRAb(Thyroid Stimulating Hormone Receptor Antidoby) ELISA Kit

Mouse TRACP-5b(TartRate-Resistant Acid Phosphatase 5b) ELISA Kit

間二氯苯標準溶液 1000μg/ml,溶劑：醇10×DNA上樣緩沖液 Loading Buffer地塞米松環(huán)氧水解物Mouse TRAIL/TNFSF10(Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand) ELISA Kit

Mouse TRF(Transferrin) ELISA Kit

間二氯苯標樣 分析標準品，基體：醇5×RNA上樣緩沖液(非變性)  Loading Buffer   非變性的沒有酰胺

庚炔羧酸酯Mouse TrxR1(Thioredoxin Reductase 1) ELISA Kit

Mouse TRY(Trypsin) ELISA Kit

鄰苯二酸二正辛酯標準溶液 1000μg/ml，基體：醇5×RNA上樣緩沖液(非變性) 二氯酸鈉Mouse TSH(Thyroid Stimulating Hormone) ELISA Kit

Mouse TSP-1(Thrombin Sensitive Protein 1) ELISA Kit

鄰苯二酸二異辛酯  標準溶液1000μg/ml，溶劑：醇2×RNA上樣緩沖液(變性) 羥基淀粉鈉Mouse TTR(Transthyretin) ELISA Kit

Mouse TXB2(Thromboxane B2) ELISA Kit

鄰苯二酸二異辛酯 標準溶液500μg/ml，溶劑：醇2×RNA上樣緩沖液(變性) 對氧基苯酸Mouse UCHL1(Ubiquitin Carboxyl Terminal Hydrolase L1) ELISA Kit

Mouse VASPIN(Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) ELISA Kit

中標樣 分析標準品10×MOPS 緩沖液氟蟲腈Mouse VE-Cadherin(Vascular Endothelial Cadherin) ELISA Kit

Mouse VEGFD(Vascular Endothelial cell Growth Factor D) ELISA Kit

2,4-二硝基氯苯標準溶液 1000μg/ml,溶劑：醇10×MOPS 緩沖液樟腦粉Mouse VEGFR-2/KDR(Vascuoar Endothelial Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit

Mouse VF(Visfatin) ELISA Kit

標準溶液 100μg/ml，溶劑：醇（劇20×SSC pH7.0碲化鉍Mouse VIP(Vasoactive Intestinal Peptide) ELISA Kit

Mouse α1-AGP(α1-Acid glycoprotein) ELISA Kit

中標樣 分析標準品）20×SSC pH7.02-巰基-3-醇Mouse α1-MG(α1-Microglobulin) ELISA Kit

Mouse α-CTx(Alpha Crosslaps) ELISA Kit
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。