Corynebacteriumtrachiae

微生物菌種的培養：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養基，培養基中含有一些適合產孢子的營養成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養環境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養可直接或間接誘導孢子形成。面的培養溫度大多數為28 ℃，少數為37 ℃，培養時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產品為培養基。這是由于這些農產品中的營養成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養一般為25～28 ℃，培養時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養成分不宜過濃，子瓶培養基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養基配方。

⑵ 種子罐種子制備　

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經培養后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級種子，把一級種子轉入發酵罐內發酵，稱為二級發酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內，經過培養形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉入發酵罐內發酵，稱為三級發酵。同樣道理，使用三級種子的發酵，稱為四級發酵。

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菌種的培養：

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業發酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純生產菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的生產菌種，用無菌手續挑取少許，接入瓊脂斜面培養基上，在25℃（或較高溫度）下培養5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數采用大米、小米之類的天然培養基）。

5、將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養基上，于25～28℃培養14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產上延續使用半年左右。

6、如果有些生產菌種不產孢子，如赤霉素產生菌或產孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

保存方法：

傳代保存法：培養基的濃度不宜過高，營養成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養基中添加少量碳酸鈣 [3] 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

雙鏈RNA腺苷酸脫抗體（N端）Human LIN7C ELISA KitD-

腺苷單活化蛋白激α2抗體Human LILRA4 ELISA Kit小鼠鉤端螺旋體IgG（Lep IgG）ELISA試劑盒,

腺苷酸激抗體Human LIMK2 ELISA Kit小鼠半乳糖6酯（Gal-6S）ELISA試劑盒,

α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1Human LGI2 ELISA Kit小鼠胰島素（INS）ELISA試劑盒,

凋亡相關蛋白3抗體Human LIMS1 ELISA Kit小鼠受體（TR）ELISA試劑盒,

肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體Human LGI3 ELISA KitⅠ型前膠原N端前肽（PⅠNP）ELISA試劑盒--動物，人

ATP結合蛋白家族7抗體Human LIMK2 ELISA Kit丁型肝炎IgG（HDV IgG）ELISA試劑盒--動物，人

ASCL2蛋白抗體Human LIMS1 ELISA Kit抗類缺陷病抗體（HIV）ELISA試劑盒--動物，人

Corynebacteriumtrachiae2-氨-5-溴吡 98%Anti-HisX6/FITC  熒光素標記聚組氨抗體/抗His tag標簽抗體IgG豬質金屬蛋白17(MMP-17)聯免疫吸附測定試劑盒

N-乙酰-4-哌酮 98%Anti-HIV gp41/FITC  熒光素標記艾滋病病抗體IgG豬色素P450氧化還原(CPR)聯免疫吸附測定試劑盒

5-氨-3-異噻唑 鹽鹽 97%Anti-HIV gp120/FITC  熒光素標記艾滋病病抗體IgG豬生長分化因子9(GDF9)聯免疫吸附測定試劑盒

2-乙酰并噻吩 98%Anti-HIV-1 ENV (gp160) antigen/FITC  熒光素標記艾滋病病-1包膜糖蛋白抗體IgG豬前列腺性(ACP3/PAP)聯免疫吸附測定試劑盒

2-氨-4-并噻唑 98%Anti-HIV-1 ENV (gp160) antigen/FITC  熒光素標記艾滋病病-1包膜糖蛋白抗體IgG豬膽囊收縮素/腸促胰肽B受體(CCKBR)聯免疫吸附測定試劑盒

N-叔丁-十氫異喹啉-3(S)-酰 97%Anti-HisX6/6His/His tag(CT) /FITC  熒光素標記聚組氨抗體/抗His tag（C端）標簽抗體IgG豬角質轉谷氨酰(TGM1)聯免疫吸附測定試劑盒

4-溴喹啉-2-酮 97%Anti-HisX6/6His/His tag(CT)/HRP  辣根過氧化物標記聚組氨抗體/抗His tag標簽抗體（C端）IgG豬二酯4D(PDE4D)聯免疫吸附測定試劑盒

4-溴-2,6-二氟 98%Anti-HLA-DR/FITC  熒光素標記HLA-DR抗原抗體IgG豬核孔蛋白107kda(NUP107)聯免疫吸附測定試劑盒

(R)-(+)-2-溴-alpha- 98%Anti-HLA-E/FITC  熒光素標記人類白抗原EIgG豬肺表面活性物質相關蛋白C(SPC)聯免疫吸附測定試劑盒

3-溴喹啉 98%Anti-HLA-G/FITC  熒光素標記人類白抗原G/組織相容性白抗原G抗體IgG豬堿性唾液脯氨豐富蛋白2(PRB2)聯免疫吸附測定試劑盒

1-Boc-3-氧哌 98%Anti-HMGA1/FITC  熒光素標記高遷移率族蛋白A1抗體IgG豬腦環指蛋白(BFP)聯免疫吸附測定試劑盒

N-Boc-異六氫煙堿 99%Anti-HMGA2/FITC  熒光素標記高遷移率族蛋白A2抗體IgG豬谷氧還蛋白3(GLRX3)聯免疫吸附測定試劑盒

科里內酯 98%Anti-HMGB1/FITC  熒光素標記高遷移率族蛋白B1抗體IgG豬酰肽受體2(FPR2)聯免疫吸附測定試劑盒

5--1,3,3--2-亞啉 90%Anti-HMGB4/FITC  熒光素標記高遷移率族蛋白B4抗體IgG豬脂蛋白關聯脂A2(LpPLA2)聯免疫吸附測定試劑盒

1-(2--5-磺)-3--5-吡唑酮（25CSMP）  97%Anti-HNF-1 Alpha/FITC  熒光素標記肝核因子1α抗體IgG豬睫狀神經營養因子(CNTF)聯免疫吸附測定試劑盒