細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
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產品名稱 | 兔脂肪間充質干細胞 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X0796 |
商品介紹：
名稱 兔脂肪間充質干細胞 2.組織來源：脂肪組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 兔脂肪間充質干細胞分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細胞構成，聚集成團的脂肪細胞由薄層疏松結締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時可迅速分解成甘油和脂肪酸，經血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內皮功能、纖溶活動及炎癥反應，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個極其重要的內分泌系統。脂肪組織中也存在一些干細胞群，具有自我更新能力和多向分化潛能，被稱為脂肪組織來源的間充質干細胞，簡稱脂肪間充質干細胞。與骨髓間充質干細胞相比，在來源、細胞群特點以及分化潛能等多方面極為相似。但是，脂肪間充質干細胞更易獲得足夠數量的細胞，且獲取過程中對機體損傷更小，是更為理想的自體干細胞源。脂肪組織分離得到脂肪間充質干細胞以梭形為主要形態，BrdU可標記其細胞核。 5.方法簡介： ()實驗室分離的兔脂肪間充質干細胞采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： ()實驗室分離的兔脂肪間充質干細胞經CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-Rb028 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內狀態最佳 消化液0.25% 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩定細胞狀態。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中培養；
4) 待細胞*貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。
培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
2 ug pDsRed-Express-N1 pDsRed-Express-N1 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人血管加壓素V1b受體(V1bR)ELISA試劑盒
產氣莢膜梭菌測定用培養基 Clostridium Perfringens Assay Medium 250g 15.6-1000 pg/mL 大豆特定基因序列(Lectin)核酸檢測試劑盒
25g 偏釩酸鈉 Sodium Metavanadate 室溫保存 15.6-1000 pg/mL 人B-淋巴細胞激活抗原B7-2(
兔脂肪間充質干細胞IL-18/IGIF 白細胞介素-18/干擾素γ誘導因子抗體 規格: 0.1ml
phospho-IRS1(Tyr1222) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體 規格: 0.1mlSCDGFB/PDGF-D 小板源性生因子D(脊髓源性生因子B) 規格: 0.2ml
SCHIP1/IQCJ IQCJ抗體 規格: 0.1ml
Goat Anti-human IgM/APC APC標記的羊抗人IgM 規格: 0.1ml
MeCP2 甲基化CpG結合蛋白2抗體 規格: 0.1mlPectinesterase 果膠抗體 1ml
HSD17B1/HSD17 羥類固醇脫17β抗體 規格: 0.1mlMyf6 生肌調節因子6抗體 規格: 0.2ml
Sema3F 臂板蛋白3F抗體 規格: 0.1ml
VASP 管擴張刺激磷蛋白抗體 規格: 0.1ml
大豆-干酪素消化物培養基 Tryposec Soya Modified 250g
100mg 遺傳 G-418 Sulfate (Geneticin) 4℃保存
250mL MES Buffer,1.0M,pH8.0 MES Buffer,1.0M,pH8.0 常溫保存
50次 柱式軟體RNAout Column Mollusk RNAOUT 4℃保存
